目的探讨流式细胞术检测大鼠Th1/Th2细胞时使用刺激剂的最佳方案。方法用不同浓度佛波酯(PMA)联合不同浓度离子霉素(Ion)作为激活剂,刺激大鼠外周血T淋巴细胞,采用流式细胞仪三色法方案,观察和分析在不同浓度组合的激活剂刺激下检测T淋巴细胞内干扰素-γ(INF-γ)、白介素-4(IL-4)的分泌效果。结果 PMA浓度为25 ng/mL时,联合浓度分别为0、2、5、10、15、20μg/mL的Ion刺激大鼠淋巴细胞,胞内IFN-γ/IL-4的表达阳性率分别为(1.19±0.26)%/(2.46±0.32)%、(1.23±0.21)%/(2.56±0.86)%、(3.08±0.56)%/(12.01±2.01)%、(4.01±0.48)%/(9.80±1.80)%、(3.98±1.78)%/(11.85±4.83)%、(3.76±1.08)%/(10.78±2.35)%。结论选用工作浓度为5~10μg/mL的Ion联合工作浓度为25 ng/mL的PMA刺激培养大鼠淋巴细胞即可起到较好的激活作用,而且不会带来如CD4细胞下调、流式细胞术设门难度增加等干扰因素。在该浓度下,CD3/CD8和CD4两种设门方案均可用于大鼠Th1/Th2细胞检测。