【摘 要】
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目的研究Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核转录因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路对肺癌A549细胞生长、转移和耐药的影响。方法利用慢病毒转染体系建立稳定过表达野生型Keap1的A549细胞株模型,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测Keap1过表达对A549细胞中Nrf2基因及其靶基因表达的影响。采用黄酰罗丹比色法、流式细胞术、克隆形成实验、T
【机 构】
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310006 浙江中医药大学附属杭州第一医院肿瘤药理研究所,310006 杭州市第一人民医院转化医学研究中心,310022 杭州,浙江省肿瘤医院临床药学研究室,310022 杭州,浙江省肿瘤医院临床药
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目的研究Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核转录因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路对肺癌A549细胞生长、转移和耐药的影响。
方法利用慢病毒转染体系建立稳定过表达野生型Keap1的A549细胞株模型,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测Keap1过表达对A549细胞中Nrf2基因及其靶基因表达的影响。采用黄酰罗丹比色法、流式细胞术、克隆形成实验、Transwell侵袭实验、体外划痕实验等方法研究Keap1过表达对A549细胞生长、转移和耐药的影响。
结果Keap1过表达可引起A549细胞中Nrf2蛋白以及Nrf2靶基因mRNA的表达降低,并使A549细胞的增殖能力和克隆形成能力降低。Keap1过表达可使A549细胞阻滞于G0/G1期,其中A549-Keap1细胞中G0/G1期细胞的比例为(80.2±5.9)%,明显高于A549-GFP细胞中G0/G1期细胞的比例[(67.1±0.9)%,P<0.05]。Keap1过表达可降低A549细胞的迁移和侵袭能力,A549-Keap1细胞的迁移率仅为(35.0±7.1)%,明显低于A549-GFP细胞的迁移率[(52.5±10.6)%,P<0.05];A549-Keap1细胞的侵袭数量为(156.33±17.37)个/高倍视野,明显低于A549-GFP细胞的侵袭数量[(306.67±22.19)个/高倍视野,P<0.05]。过表达Keap1的A549细胞对卡铂和吉西他滨的敏感性增加,其中卡铂对A549-GFP细胞的IC50为(107.8±12.9)μmol/L,对A549-Keap1细胞的IC50为(52.1±3.3)μmol/L,差异有统计学意义(P<0.01);吉西他滨对A549-GFP细胞的IC50为(9.9±0.5)μmol/L,对A549-Keap1细胞的IC50为(6.8±1.2)μmol/L,差异亦有统计学意义(P<0.01)。
结论Keap1过表达影响肺癌A549细胞中Nrf2和下游靶基因的表达,抑制肿瘤细胞的增殖和转移,增加细胞对化疗药物的敏感性。
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专家简介 从1997年开始,赵之心以《体质锻炼与体质健康》、《女性健康》、《骨骼健康》等题材在全国做了近2500场报告,参与人数将近百万人次。在报刊及杂志上发表了近600篇文章。单独或参与著有《想对健身者说》、《强身健骨操》、《有氧健身走》、《骨骼健康》、《赵之心谈女性运动健康》、《运动成就健康》、《28种不生病的锻炼方法》、《快乐健身一箩筐》等多本图书,并录制了《强身健骨操》、《有氧大步走》等