【摘 要】
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目的分析弓形虫主要表膜蛋白SAG1在甲醇酵母高效表达系统表达的可行性.方法在5′端和3′端引物分别引入EcoRⅠ和SpeⅠ酶切位点,PCR扩增SAG1成熟肽编码区基因,定向克隆到甲醇
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目的分析弓形虫主要表膜蛋白SAG1在甲醇酵母高效表达系统表达的可行性.方法在5′端和3′端引物分别引入EcoRⅠ和SpeⅠ酶切位点,PCR扩增SAG1成熟肽编码区基因,定向克隆到甲醇酵母分泌型表达质粒pMETαA中,构建不带6个组氨酸尾序列的重组质粒.重组质粒被PacⅠ酶切下表达盒,氯化锂化学法转化腺嘌呤营养缺陷型毕赤甲醇酵母株PMD11和PMD16, 通过腺嘌呤营养缺陷型选择培养基YPD筛选酵母重组子,并利用MM/MD选择培养板分析外源基因表达盒整合到重组酵母染色体中的方式.筛选甲醇利用野生型的重组酵母
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