【摘 要】
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目的:探讨鲍曼不动杆菌外膜蛋白A(outer membrance protein A,OmpA)对人单核巨噬THP-1细胞自噬和凋亡的影响及其可能机制.方法:构建OmpA/pET-28a载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3
【机 构】
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江苏大学医学院, 江苏 镇江212013;江苏大学附属医院检验科, 江苏 镇江212001;扬州市广陵区疾病预防控中心,江苏 扬州225001
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目的:探讨鲍曼不动杆菌外膜蛋白A(outer membrance protein A,OmpA)对人单核巨噬THP-1细胞自噬和凋亡的影响及其可能机制.方法:构建OmpA/pET-28a载体,转化大肠埃希菌BL21(DE3)表达纯化重组OmpA蛋白,并免疫家兔制备多克隆抗体;采用蛋白质印迹法检测呼吸机相关性肺炎患者发病前后血清中OmpA抗体水平变化.以不同浓度(1、10μg/mL)重组OmpA蛋白分别刺激THP-1细胞1、3、6 h,采用蛋白质印迹法检测自噬相关蛋白LC-3和Beclin-1表达,流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧产生,荧光实时定量PCR检测细胞含NLR家族Pyrin域NOD样受体家族3(NLRP3)、Caspase-1和IL-1β等mRNA表达.结果:自制多抗可以识别临床菌株OmpA蛋白.呼吸机相关性肺炎患者发病前后,血清中均可检出OmpA抗体(IgG型),且发病后OmpA抗体水平显著高于气管插管前(P<0.05).重组OmpA蛋白刺激THP-1细胞后,细胞自噬相关蛋白LC3-Ⅱ和Beclin-1表达显著上升,细胞凋亡率显著升高,呈一定的时间和浓度依赖性(P<0.05).与对照组比,在重组OmpA蛋白作用1 h时,细胞IL-1βmRNA表达和活性氧含量显著增加(P<0.05);3 h和6 h时,3种mRNA表达量和活性氧含量显著降低(P<0.05).结论:OmpA通过激活THP-1细胞NLRP3炎症小体,释放活性氧和IL-1β等炎症介质,诱导THP-1细胞自噬和凋亡发生.
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