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【摘要】目的：研究巨噬细胞炎性蛋白-2（MIP-2）在鼠棘阿米巴角膜炎病理改变中的作用。 方法：采用角膜表面镜片术辅助上皮刮除术建立鼠棘阿米巴角膜炎模型，利用免疫组织化学染色观察MIP-2的分布和表达，利用图像分析系统进行半定量分析。结果：模型组中MIP-2均有表达，且在第5天活性到达高峰。正常角膜组织未见其表达。结论：MIP-2在棘阿米巴角膜炎角膜病变组织中均有表达，它们在棘阿米巴角膜炎的发病机制中可能发挥着重要作用。
【关键词】：棘阿米巴性角膜炎，MIP-2
棘阿米巴性角膜炎（AK）是由棘阿米巴原虫感染所致的角膜病变，致盲率极高。本实验通过建立鼠棘阿米巴角膜炎模型，对巨噬细胞炎性蛋白-2（MIP-2）的表达水平进行检测，探讨它们在棘阿米巴性角膜炎发病机制的作用，以期进一步明确该病的发病机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 小白鼠60只，其中制作棘阿米巴角膜炎模型鼠50只，对照组10只。
1.1.2 实验虫株 实验用标准棘阿米巴虫株
1.1.3 自制角膜接触镜 无菌操作下取新鲜的猪角膜并置于无菌甘油中-20℃保存。
1.2 方法
1.2.1 模型建立[[1] 朱学军，林秀丽，胡建章等.角膜表面镜片术建立棘阿米巴角膜炎模型.眼科新进展.2010，6： 418-421.][1] 用无菌刀片刮除角膜中心上皮，取出制备好的角膜接触镜，将其固定于鼠角膜缘外浅层巩膜，将0.1ml浓度为1*106个/ml的棘阿米巴滋养体悬液注入上述两层间，行睑裂缝合术。术后24 小时拆除缝线，取出角膜接触镜。
1.2.2 病原检查：实验眼角膜刮片行10%KOH湿封片检查，并在光学显微镜下观察是否存在棘阿米巴包囊。
1.2.3标本制备 模型建立后第1、3、5、7、14天，随机数字表法取10只鼠，裂隙灯显微镜下观察角膜病变情况后，处死小白鼠后取角膜，制作石蜡切片。
1.2.4免疫组织化学方法 石蜡切片使用SABC即用型免疫组化染色试剂盒和DAB显色试剂盒进行免疫组织化学染色，显微镜下观察MIP-2在角膜的表达。每组切片在显微镜下随机选取4个视野，在相同条件下照相，利用计算机图片分析系统计算阳性染色的平均光密度值。
1.3统计学方法
利用SPSS13.0对实验数据进行t检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 10%KOH湿封片结果：60只实验眼角膜物刮片均可在镜下检出棘阿米巴原虫的包囊，未见细菌混合感染。对照组角未见滋养体或包囊，亦未见细菌生长。
2.2 MIP-2的表达 MIP-2主要表达于实验组角膜的上皮层和角膜基质层。建模后第1天，MIP-2即在实验组角膜有表达，随着时间的延长，MIP-2表达逐渐增强，并在建模后5天达到峰值，之后逐渐下降。对照组未见MIP-2的表达。各组之间平均光密度值差别比较具有统计学意义（P<0.01）。见表1。
3 讨论
MIP-2是一种对中性粒细胞具有特异性趋化作用的细胞因子，它能够选择性诱导中性粒细胞在病变组织聚集[[3] Sigrid PM， Julie Z， Henry M， et al. A synthetic，non-peptide CXCR2 antagonist blocks MIP-2 induced neutrophil migration in mice[J].Immunobiology 2004；209（3）：225-233.][3]。本实验中，正常对照组未检测到MIP-2的表达，在感染后24小时MIP-2表达即升高，在感染后第5天达到峰值，之后明显下降，这与中性粒细胞在棘阿米巴角膜炎中的浸润程度相符，这表明MIP-2发挥了诱导中性粒细胞在病变组织聚集的作用，参与了棘阿米巴角膜炎病程早期的免疫防御反应。但是随着MIP-2持续高水平的表达，加剧了中性粒细胞的浸润程度和时间，进而导致炎性病变的恶化和局部组织的坏死 [[4] Kernaeki KA，Barrett RP，Hobden JA，et al. Macrophage inflammatory protein-2 is a mediator of polymorphonuclear nertrophil infiux in ocular baeterial infection[J].J Immunol，2000， 164（2）：1037-1045.][4]。所以我们不妨设想，将MIP-2的表达控制在合适的时机和水平，既能够发挥其抵抗病原体和促进病变修复的功能，又能降低其破坏性，这或许能够为广大医务者的治疗手段提供新的的突破点。
【关键词】：棘阿米巴性角膜炎，MIP-2
棘阿米巴性角膜炎（AK）是由棘阿米巴原虫感染所致的角膜病变，致盲率极高。本实验通过建立鼠棘阿米巴角膜炎模型，对巨噬细胞炎性蛋白-2（MIP-2）的表达水平进行检测，探讨它们在棘阿米巴性角膜炎发病机制的作用，以期进一步明确该病的发病机制。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 小白鼠60只，其中制作棘阿米巴角膜炎模型鼠50只，对照组10只。
1.1.2 实验虫株 实验用标准棘阿米巴虫株
1.1.3 自制角膜接触镜 无菌操作下取新鲜的猪角膜并置于无菌甘油中-20℃保存。
1.2 方法
1.2.1 模型建立[[1] 朱学军，林秀丽，胡建章等.角膜表面镜片术建立棘阿米巴角膜炎模型.眼科新进展.2010，6： 418-421.][1] 用无菌刀片刮除角膜中心上皮，取出制备好的角膜接触镜，将其固定于鼠角膜缘外浅层巩膜，将0.1ml浓度为1*106个/ml的棘阿米巴滋养体悬液注入上述两层间，行睑裂缝合术。术后24 小时拆除缝线，取出角膜接触镜。
1.2.2 病原检查：实验眼角膜刮片行10%KOH湿封片检查，并在光学显微镜下观察是否存在棘阿米巴包囊。
1.2.3标本制备 模型建立后第1、3、5、7、14天，随机数字表法取10只鼠，裂隙灯显微镜下观察角膜病变情况后，处死小白鼠后取角膜，制作石蜡切片。
1.2.4免疫组织化学方法 石蜡切片使用SABC即用型免疫组化染色试剂盒和DAB显色试剂盒进行免疫组织化学染色，显微镜下观察MIP-2在角膜的表达。每组切片在显微镜下随机选取4个视野，在相同条件下照相，利用计算机图片分析系统计算阳性染色的平均光密度值。
1.3统计学方法
利用SPSS13.0对实验数据进行t检验，以P<0.05表示差异有统计学意义。
2 结果
2.1 10%KOH湿封片结果：60只实验眼角膜物刮片均可在镜下检出棘阿米巴原虫的包囊，未见细菌混合感染。对照组角未见滋养体或包囊，亦未见细菌生长。
2.2 MIP-2的表达 MIP-2主要表达于实验组角膜的上皮层和角膜基质层。建模后第1天，MIP-2即在实验组角膜有表达，随着时间的延长，MIP-2表达逐渐增强，并在建模后5天达到峰值，之后逐渐下降。对照组未见MIP-2的表达。各组之间平均光密度值差别比较具有统计学意义（P<0.01）。见表1。
3 讨论
MIP-2是一种对中性粒细胞具有特异性趋化作用的细胞因子，它能够选择性诱导中性粒细胞在病变组织聚集[[3] Sigrid PM， Julie Z， Henry M， et al. A synthetic，non-peptide CXCR2 antagonist blocks MIP-2 induced neutrophil migration in mice[J].Immunobiology 2004；209（3）：225-233.][3]。本实验中，正常对照组未检测到MIP-2的表达，在感染后24小时MIP-2表达即升高，在感染后第5天达到峰值，之后明显下降，这与中性粒细胞在棘阿米巴角膜炎中的浸润程度相符，这表明MIP-2发挥了诱导中性粒细胞在病变组织聚集的作用，参与了棘阿米巴角膜炎病程早期的免疫防御反应。但是随着MIP-2持续高水平的表达，加剧了中性粒细胞的浸润程度和时间，进而导致炎性病变的恶化和局部组织的坏死 [[4] Kernaeki KA，Barrett RP，Hobden JA，et al. Macrophage inflammatory protein-2 is a mediator of polymorphonuclear nertrophil infiux in ocular baeterial infection[J].J Immunol，2000， 164（2）：1037-1045.][4]。所以我们不妨设想，将MIP-2的表达控制在合适的时机和水平，既能够发挥其抵抗病原体和促进病变修复的功能，又能降低其破坏性，这或许能够为广大医务者的治疗手段提供新的的突破点。