【摘 要】
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目的 采用人肾皮质近曲小管上皮细胞系HK-2细胞明确何首乌中主要蒽醌类成分大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素甲醚和大黄酚与肾毒性的相关性。方法 HK-2细胞经2.5、10、20、40、80、120、160μmol·L-1的大黄素、芦荟大黄素、大黄酸和3.125、12.5、25、50、100、150、200μmol·L-1的大黄素甲醚和大黄酚作用24、48 h后，采用细胞计数试剂盒法（CCK-8）测
【基金项目】
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国家科技重大专项重大新药创制（2018ZX09201017）； 国家自然科学基金资助项目（81973476）；
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目的 采用人肾皮质近曲小管上皮细胞系HK-2细胞明确何首乌中主要蒽醌类成分大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素甲醚和大黄酚与肾毒性的相关性。方法 HK-2细胞经2.5、10、20、40、80、120、160μmol·L-1的大黄素、芦荟大黄素、大黄酸和3.125、12.5、25、50、100、150、200μmol·L-1的大黄素甲醚和大黄酚作用24、48 h后，采用细胞计数试剂盒法（CCK-8）测定这些单体对HK-2细胞存活率的影响。HK-2细胞经6.25、12.5、25、50、100μmol·L-1的大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素甲醚和大黄酚作用24、48 h后，收集细胞培养液检测乳酸脱氢酶（LDH）释放水平；采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测肾损伤分子-1（Kim-1）蛋白表达水平；以JC-10荧光探针检测线粒体膜电位（MMP）的变化；并以流式检测法测定5种蒽醌类化合物对细胞凋亡率的影响。结果 大黄素、芦荟大黄素、大黄酸和大黄酚致HK-2细胞存活率随给药时间和给药浓度的增加而降低，与对照组相比差异具有统计学意义（P＜0.05），而大黄素甲醚和大黄酚200μmol·L-1给药48 h后细胞存活率仍大于75%。大黄素、芦荟大黄素和大黄素甲醚100μmol·L-1给药48 h后，LDH释放水平相较于对照组显著升高（P＜0.01）。5种何首乌蒽醌类单体成分对HK-2细胞给药后细胞上清中Kim-1水平未呈现出随浓度增加而升高的趋势，仅在100μmol·L-1给药后，Kim-1水平较对照组显著上升（P＜0.05）。5种何首乌蒽醌类单体成分给药后，HK-2细胞的线粒体膜电位均随处理浓度的增大和给药时间的延长而下降，但仅25、50、100μmol·L-1的大黄素、芦荟大黄素和50、100μmol·L-1的大黄酸给药48 h后检测到显著的细胞凋亡（P＜0.05）。结论 大黄素、芦荟大黄素和大黄酸是导致何首乌肾毒性的潜在蒽醌类成分。何首乌中其他成分的肾毒性风险有待进一步研究，提高安全合理用药水平。
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