【摘 要】
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目的研究17β-雌二醇（E2）对髁突软骨细胞增殖调节的影响,并初步探讨磷酸化雷帕霉素哺乳动物靶标（p-mTOR）在该调节过程中发挥的作用。方法取6周龄雌性SD大鼠髁突软骨细胞进行原代培养,从第二代分别给予不同浓度的E2和/或雷帕霉素（RAPA）;CCK8法检测不同给药条件下,髁突软骨细胞在第24、48、72小时的增殖情况;逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测软骨细胞中雌激素受体α（ERα）、雌
【基金项目】
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天津市自然科学基金重点项目（18JCZDJC3200）~~；
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目的研究17β-雌二醇（E2）对髁突软骨细胞增殖调节的影响,并初步探讨磷酸化雷帕霉素哺乳动物靶标（p-mTOR）在该调节过程中发挥的作用。方法取6周龄雌性SD大鼠髁突软骨细胞进行原代培养,从第二代分别给予不同浓度的E2和/或雷帕霉素（RAPA）;CCK8法检测不同给药条件下,髁突软骨细胞在第24、48、72小时的增殖情况;逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）检测软骨细胞中雌激素受体α（ERα）、雌激素受体β（ERβ）、自噬相关基因6 （Beclin-1）、自噬相关基因5 （ATG-5）、Ⅱ型胶原（COLⅡ）相关基因的表达;蛋白印迹（Western blot）法检测软骨细胞中ERα、ERβ、Beclin-1、脂质化轻链蛋白3B （LC3-Ⅱ）、p-mTOR相关蛋白的表达及加入雌激素受体拮抗剂后各组细胞p-mTOR的表达。结果 E2可显著促进体外培养的髁突软骨细胞增殖,并在10-8mol·L-1浓度下达到峰值;RAPA可以显著抑制细胞增殖。10-8mol·L-1E2上调软骨细胞ERα、COLⅡ基因表达（P<0.01）和ERα、p-mTOR蛋白表达（P<0.05）,下调软骨细胞Beclin-1、ATG-5基因表达（P<0.05）和Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白表达（P<0.05）;RAPA可以上调细胞Beclin-1和LC3-Ⅱ蛋白水平（P<0.01）,下调p-mTOR的表达（P<0.01）;ERα拮抗剂可以显著降低细胞中p-mTOR的表达（P<0.01）。结论 E2在浓度为10-8mol·L-1时可有效通过ERα-p-mTOR途径激活mTOR的磷酸化,抑制自噬,提高髁突软骨细胞增殖速度。
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