【摘 要】
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目的 探讨在枯草芽孢杆菌中分泌表达乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)核心蛋白(HBV core protein,HBc)的可行性.方法 PCR扩增HBc基因片段,插入pBE S-DNA穿梭质粒的MCS区
【机 构】
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重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室,重庆400016
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目的 探讨在枯草芽孢杆菌中分泌表达乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)核心蛋白(HBV core protein,HBc)的可行性.方法 PCR扩增HBc基因片段,插入pBE S-DNA穿梭质粒的MCS区域,构建重组质粒pBE S-DNA/HBc,将其线性化后与分泌信号肽DNA(SP DNA)连接产物转化大肠埃希菌Stellar感受态细胞,收获全部阳性菌落,并将提取的混合质粒转化至枯草芽孢杆菌RIK1285感受态细胞,ELISA法筛选分泌表达HBc蛋白的阳性菌落,选取分泌表达量最高的菌株放大培养,培养上清经亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE及Western blot分析重组蛋白HBc的分泌表达.结果 经双酶切和测序鉴定,重组质粒pBES-DNA/HBc构建正确.随机挑选的50株重组枯草芽孢杆菌经鉴定有16株含HBc基因,其中4株培养上清中检测到重组蛋白HBc的阳性表达.经SDS-PAGE分析,重组蛋白HBc在培养上清中呈单体、二聚体及多聚体状态;经Western blot分析,重组蛋白HBc能与HBc抗体特异性结合.结论 重组蛋白HBc在枯草芽孢杆菌中可实现分泌表达,并具有抗原活性.
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