【摘 要】
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目的:为了探索用酵母茵表达乙型干扰素(倍菲隆)的大批生产的发酵工艺流程及优化的重要参数.选用15L不锈钢发酵罐作为乙型干扰素发酵工艺研究系统.方法:探索了种细胞密度对初
【机 构】
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上海第二医科大学,大连金威技术有限公司,北京紫辰医药生物有限公司
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目的:为了探索用酵母茵表达乙型干扰素(倍菲隆)的大批生产的发酵工艺流程及优化的重要参数.选用15L不锈钢发酵罐作为乙型干扰素发酵工艺研究系统.方法:探索了种细胞密度对初始发酵期(甘油利用期)的影响,启动甘油补充期的溶解氧浓度,诱导目的蛋白表达时添加甲醇的速率条件控制,pH对酵母茵生长与蛋白表达的影响以及发酵时间对乙型干扰素表达量影响等重要发酵工艺参数.结果:接种高密度的种茵(OD600为9)时酵母茵增殖快,湿细胞重量于18h即达到157g/L.当DO恢复至67%时即开始补充甘油可使酵母茵在5h内增殖达到219g/L.添加甲醇速率从2%(甲醇终浓度为0.03%)开始,逐步增加,在24h内达到33%的添加速率(甲醇终浓度为0.5%).甲醇诱导前pH为6时最有利于酵母茵生长,在蛋白表达时期,控制发酵罐内pH值在3.0,可得最高蛋白表达量.发酵70h乙型干扰素表达量达到高峰.结论:接种高密度种菌可促进工程茵生长,当DO恢复至67%时开始补充甘油可加快酵母茵生长,在诱导期中缓慢添加甲醇并维持发酵罐pH为3.0,发酵70h可获得最佳蛋白生产量.
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