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目的 使用慢病毒介导的RNA干扰(RNAi)方法抑制小鼠血管内皮细胞异种抗原半乳糖α1,3-半乳糖(Galα1,3-Gal)的表达.方法 经体外设计合成针对α1,3-半乳糖基转移酶(α1,3-GT)mRNA的序列特异性小发夹RNA(shRNA),并构建携带α1,3-GT shRNA的重组慢病毒载体,以慢病毒感染小鼠血管瘤内皮细胞系EOMA细胞.采用荧光实时定量聚合酶链反应检测转染后的EOMA细胞α1,3-GT mRNA表达水平的变化;免疫荧光法和流式细胞术检测转染后的EOMA细胞异种抗原Galα1,3-Gal表达水平的变化.并将转染后的EOMA细胞与人血清混合培养,用四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞存活率.结果 成功获得携带α1,3-GT shRNA的成熟重组慢病毒颗粒,转染EOMA细胞效率可达75%.与空白对照组、空转染组以及阴性siRNA对照组比较,重组慢病毒转染EOMA细胞后,能有效抑制α1,3-GT的表达,抑制率为88%(P＜0.05);Galα1,3-Gal抗原表达水平明显降低(P＜0.05);而空白对照组、空转染组和阴性siRNA对照组间的差异无统计学意义(P＞0.05).重组慢病毒转染后的EOMA细胞与人血清混合培养后的存活率较各对照组明显提高(P＜0.05).结论 成功构建靶向α1,3-GT基因的重组慢病毒载体,通过RNAi沉默α1,3-GT基因,抑制EOMA细胞异种抗原Galα1,3-Gal的表达,在体外实验中可减轻异种超急性排斥反应。