【摘 要】
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目的:本研究采用的rhEPO-Fc融合蛋白是首次将编码人IgG Fc段的基因与编码人EPO的基因片段连接,并将其克隆至高表达质粒载体中,用该质粒转染CHO细胞进行分泌表达所得。通过对r
【机 构】
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同济大学生命科学与技术学院,上海美恩生物技术有限公司
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目的:本研究采用的rhEPO-Fc融合蛋白是首次将编码人IgG Fc段的基因与编码人EPO的基因片段连接,并将其克隆至高表达质粒载体中,用该质粒转染CHO细胞进行分泌表达所得。通过对rhEPO-Fc融合蛋白的质量检验和实验方法参数的选择,建立rhEPO-Fc融合蛋白的质量标准。方法:采用细胞MTT比色法及Human EPO ELISA试剂盒测定rhEPO-Fc的体外生物学活性,Lowry法测定蛋白含量,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量,高效液相色谱法(HPLC)测定纯度,紫外分光光度法测定紫外吸收光谱,地高辛(DIG)标记的核酸探针法测定外源性DNA残留量,等电聚焦电泳法测定等电点,间苯二酚显色法测定唾液酸(SA)含量。结果:rhEPO-Fc的比活性为1.1×105IU/mg蛋白,蛋白含量为1.58mg/ml,相对分子质量约为59000道尔顿,纯度超过99.0%,紫外最大吸收峰约在280nm波长处,外源性DNA残留量小于10pg/mg,等电点为4.5～6.5,唾液酸含量为11.92mol/mol蛋白质。结论:所建立的质控方法已用于rhEPO-Fc制品的检定,可以有效地控制rhEPO-Fc制品的质量。
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