人天然Fab段噬菌体抗体库的构建

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目的通过构建人天然Fab段噬菌体抗体库为恶性肿瘤的免疫治疗提供新方法.方法取4个健康献血员新鲜血液各200ml,分离淋巴细胞,提取总RNA,经逆转录合成cDNA,设计多对引物,以PCR扩增抗体轻链和重链Fd段cDNA.轻链PCR产物和质粒载体pComb3经SacⅠ和XbaⅠ酶切,由T4 DNA连接酶连接,电穿孔转化感受态大肠杆菌XL1-Blue,扩增后提取质粒,构建轻链库.轻链库和重链Fd段PCR产物经XhoⅠ和SpeⅠ酶切,同样方法连接转化XL1-Blue,加入辅助噬菌体VCSM13产生噬菌体抗体全库.
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