【摘 要】
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目的 研究一氧化氮(nitric oxide,NO)在骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的免疫调节作用.方法 贴壁筛选法分离培养Lewis大鼠骨髓间充质干细胞.以刀豆蛋白A(con
【机 构】
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哈尔滨医科大学附属第二医院普通外科
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目的 研究一氧化氮(nitric oxide,NO)在骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的免疫调节作用.方法 贴壁筛选法分离培养Lewis大鼠骨髓间充质干细胞.以刀豆蛋白A(concanavalin A,ConA)作为刺激因素,SD大鼠外周血分离的T淋巴细胞作为反应细胞,采用CCK-8法检测T淋巴细胞与MSCs共培养后其增殖能力的变化.然后采用RT-PCR、Western blot检测MSCs诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)mRNA与蛋白的表达;Griess法检测上清液亚硝酸盐含量;ELISA检测上清液Th1细胞因子IFN-γ和Th2细胞因子IL-4的水平.结果 MSCs明显抑制ConA诱导的T淋巴细胞增殖,抑制作用因细胞比例的不同而有所区别.当实验组MSC:T为1:10时最明显,增殖率为(33.83±2.10)%,而1:80组[(78.62±3.80)%]与不含MSCs的阳性对照组[(79.03±1.70)%]差异无统计学意义(P＞0.05).实验组MSCs的iNOS mRNA与蛋白的表达以及上清液中亚硝酸盐含量均较阳性对照组明显上调,1:10～1:40的范围内呈明显递增趋势,但1:80组与1:40组差异无统计学意义(P＞0.05).在加入iNOS特异性抑制剂2-甲基-2-巯基硫酸脲(S-methylisothiourea sulfate,SMT)后,各组T淋巴细胞增殖率基本恢复.实验组IFN-γ含量随MSCs所占比例的降低而增加,各组IL-4含最差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MSCs对同种异体外周血T淋巴细胞的增殖有免疫调节作用,机制可能与其分泌的可溶性因子NO影响了 Th1/Th2平衡有关.
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