【摘 要】
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目的:构建3种淀粉样前体蛋白(APP)胞外结构域突变体细胞株并进行功能的初步验证。方法:通过Touch down PCR的方法扩增E1结构域缺失的APP695片段以及E1和信号肽双缺失的片段,
【机 构】
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贵州医科大学细胞工程生物医药技术国家地方联合工程实验室,中国医学科学院成体干细胞转化研究重点实验室
【基金项目】
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贵州省科技合作计划项目[黔科合LH字(2015)7337];国家自然科学基金项目(31660316);贵阳市人民政府-贵州医科大学科学技术联合基金(GY2017-8)
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目的:构建3种淀粉样前体蛋白(APP)胞外结构域突变体细胞株并进行功能的初步验证。方法:通过Touch down PCR的方法扩增E1结构域缺失的APP695片段以及E1和信号肽双缺失的片段,采用融合PCR的方法扩增E2结构域缺失的APP695片段,并将获得的片段连接于pCMV-APP695载体中得到APP胞外结构域突变体质粒;质粒转染CHO细胞后,添加G418筛选表达APP胞外结构域突变体的单克隆细胞系;通过Western blot方法检测APP胞外结构域突变体的表达及胞外分泌水平,分析信号肽对该突变体
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