【摘 要】
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目的 探讨人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)基因沉默对人卵巢癌细胞株A2780凋亡的影响及机制.方法 构建针对NGAL基因的siRNA真核表达载体,转染入A2780细胞中,实验分为3组:空白对照组(Control)、转染NGAL-siRNA沉默组(NGAL-siRNA)和转染阴性对照组(NC-NGAL).免疫荧光检测NGAL在A2780细胞及IOSE80正常卵巢细胞的表达情况.通过RNA技术沉默NGAL后,运
【机 构】
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锦州医科大学基础医学院解剖学教研室,辽宁锦州121000;辽宁省健康产业集团抚矿总医院,中国医科大学第七临床学院检验科,辽宁抚顺113008;锦州医科大学基础医学院解剖学教研室,辽宁锦州,121000
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目的 探讨人中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin,NGAL)基因沉默对人卵巢癌细胞株A2780凋亡的影响及机制.方法 构建针对NGAL基因的siRNA真核表达载体,转染入A2780细胞中,实验分为3组:空白对照组(Control)、转染NGAL-siRNA沉默组(NGAL-siRNA)和转染阴性对照组(NC-NGAL).免疫荧光检测NGAL在A2780细胞及IOSE80正常卵巢细胞的表达情况.通过RNA技术沉默NGAL后,运用qRT-PCR及Western blot检测沉默NGAL基因效率.CCK-8法检测细胞活力,TUNEL染色及流式细胞仪检测细胞凋亡率,Western blot检测NF-κB、Caspase-3蛋白表达.结果 NGAL在A2780细胞呈高水平表达.NGAL-siRNA组NGAL基因及蛋白表达都受到明显的抑制(P＜0.01).与Control组相比,NGAL-siRNA组细胞凋亡率及Caspase-3蛋白表达明显增加,细胞活力及NF-κB蛋白表达明显下降(P＜0.01),而NC-NGAL组各项指标与Control组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 沉默人卵巢癌细胞株A2780中NGAL基因表达,抑制细胞生长并促进细胞凋亡,与上调Caspase-3蛋白表达和下调NF-κB蛋白表达相关.
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