论文部分内容阅读
目的 从人脑胶质瘤体外细胞系和胶质瘤组织中分离、鉴定肿瘤干细胞,为进一步研究其生物学特性奠定基础.方法 将人胶质瘤SHG44细胞和手术标本制成的单细胞,分别用含血清培养基(DMEM+10% FBS)和无血清培养基(DMEM/F12,添加bFGF、LIF和EGF)培养.用CD133免疫磁珠筛选,流式细胞仪和免疫荧光共聚焦显微镜检测干细胞、祖细胞和分化细胞特异性标志物.结果 SHG44细胞培养1周,用CD133磁珠分离得到的CD133+细胞的比例:血清组为0.021%,无血清组为1.2%.流式细胞仪检测:(1)Hoechst 33342-细胞比例:血清组为1.5%,无血清组为16.4%;(2)nestin+细胞比例:血清组为7.2%,无血清组为51.05%;(3)免疫磁珠分离的CD133+细胞再用流式细胞仪测得的CD133+细胞为83.02%,CD133-细胞群中有3.32%的CD133+细胞.标本源肿瘤细胞在无血清条件下培养两天后CD133磁珠分离CD133+细胞比例为4%.CD133+细胞在分化不同阶段共表达或分别表达祖细胞标志物nestin、神经元和胶质细胞特异性标志蛋白MAP2和GFAP.结论 在胶质瘤细胞系和胶质瘤组织中均存在CD133+的脑肿瘤干细胞,具有自我更新和多向分化潜能、在无血清培养下细胞球体中CD133+细胞仍占少数,而nestin+细胞占多数,可作为进一步研究脑肿瘤干细胞生物学特性的实验材料在相关领域中的应用。