乳腺癌MCF-7细胞p21WAF1/CIP1启动子区HDAC1高功能结合位点的研究

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目的研究乳腺癌MCF-7细胞中组蛋白去乙酰化酶1(histone deacetylases 1,HDAC1)募集于p21WAF1/CIP1启动子区调控其转录活性的特异性结合位点。方法将处于对数生长期的乳腺癌MCF-7细胞在无血清培养基中饥饿24 h后,分别用20μmol·L-10.88μL SAHA(S组)、0.625 nmol·L-110μL Leptin(L组)处理24 h,对照组(B组)细胞培养在完全型RPMI 1640培养基中。各组细胞裂解液与HDAC1抗体孵育,收集纯化结合HDAC1抗体的DNA片段,应用Realtime PCR法检测p21WAF1/CIP1启动子区从TSS到其上游(+2-4 000 bp)f1f10片段的DNA相对表达量并用2-ΔΔCT法分析。结果 B组中,HDAC1抗体在p21WAF1/CIP1启动子区f1、f8片段有高亲和力,f8片段达最高。S组中,HDAC1抗体与p21WAF1/CIP1启动子区f1f10片段结合量明显低于对照组,f8片段达最低,而在L组此片段与HDAC1抗体结合量达最大值。结论乳腺癌MCF-7细胞增殖过程中,HDAC1可被招募至p21WAF1/CIP1启动子区,该启动子区上游-2 800 bp至-3 200 bp DNA片段是与HDAC1高度结合的靶功能区。
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