RsrA-CFP融合蛋白的克隆表达及圆二色性分析

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以天蓝色链霉菌M145基因组作模板,扩增σR(sigR)的anti-sigR因子基因rsrA,得到了333bp基因;以质粒pECFP-N1作模板,扩增青色荧光蛋白基因cfp,得到了744bp基因。将两个基因融合串联,构建rsrA/cfp/pET-28a(+)融合表达质粒。利用荧光检测技术,确定大肠杆菌BL21(DE3)在OD600为0.5时,用1mmol.L-1 IPTG进行诱导能大量表达融合蛋白RsrA-CFP。用镍柱亲和层析分离纯化RsrA-CFP蛋白,并用SDS-PAGE鉴定其分子量为40kD左右。
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