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摘 要：目的 探讨衡阳地区EBV感染与乳腺癌的相关性。方法 收集不同发展阶段的乳腺病变组织100例，分别PCR法，LCMPCR法、ISH法及免疫组化法分别从DNA、RNA、蛋白质三个层面检测标本中EBV的表达情况，分析EBV与乳腺癌发生、发展的关系。结果 DNA层面：PCR法仅在22例乳腺癌标本中为阳性。采用ISH法在100标本中复检EBV DNA時，表达均为阴性。采用LCM PCR检测22例PCR扩增阳性标本的上皮细胞和间质淋巴细胞，仅在间质细胞中扩增出EBV DNA，癌组织无EBV DNA表达。RNA及蛋白质层面：EBVRNA探针的ISH法检测及免疫组化法检测所有标本，结果为阴性。结论 在该次试验中选取的衡阳地区的标本中，乳腺癌发生、发展与EBV感染无关。
关键词：乳腺肿瘤 EB病毒聚合酶链反应 原位杂交免疫组织化学
中图分类号：R36 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2017）06（b）-0211-02
EBV与鼻咽癌、淋巴瘤及胃癌等恶性肿瘤的发生和进展都有密切关系，被认为是人类肿瘤病毒之一。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤。近年来EBV感染被认为是导致乳腺癌发生的一个易感因素。该文将收集衡阳地区病人乳腺良、恶性病变组织，研究衡阳地区乳腺癌的发生是否与EBV感染有直接关系，为防治乳腺癌寻求一条新途径。
1 材料
材料收集2015—2016年在衡阳市南华大学附属南华医院收集乳腺病变组织100例，其中良性病变31例、不典型增生3例、原位癌5例、乳腺浸润癌61例。
2 方法
（1）用PCR方法扩增LMP-1基因。
（2）CM PCR法检测EBVDNA。
（3）原位杂交法检测标本中的EBVDNA及EBV RNA。
（4）免疫组化检测乳腺病变组织EBV的LMP1蛋白表达。
3 结果
3.1 检测乳腺病变组织中EBV DNA
3.1.1 PCR
100例乳腺良、恶性病变标本进行PCR扩增，22例乳腺癌标本中扩增出EBV DNA（如图1），其余的乳腺纤维腺瘤及原位癌等标本中均未检出。
3.1.2 LCM PCR检测
22例阴性样本的乳腺上皮细胞和间质细胞均未检测到EBVDNA；22例阳性样本中仅在乳腺间质细胞中扩增出EBV DNA，乳腺癌细胞中未检测到EBV DNA。
3.1.3 ISH检测
在所有病变组织中均未检测到阳性杂交信号（如图2）。
3.2 检测乳腺病变组织中EBV RNA
在61例乳腺癌标本中均未检测到EBV的小RNA的表达，结果为阴性。
3.3 乳腺病变组织中EBV LMP1 的表达
采用免疫组化法检测EBV 潜伏膜蛋白LMP1 在100 例乳腺良、恶性病变组织中的表达情况，结果均呈阴性。
乳腺癌扩增结果：阴性
1、3、5 EBV DNA阳性
2、4、6 EBV DNA阴性
4 讨论
自1994年Horiuchi等[1]首次采用PCR在乳腺癌中检测到，EBV与乳腺癌发病是否存在相关系引起了学者们极大的兴趣，也开展了大量试验[2]。但由于实验材料处理方式不同以及检测方法的差异，无法得出一致结论，EBV与乳腺癌发生、发展是否相关成为一个令人困惑的问题。
该实验在设计时用原位杂交技术、PCR法及免疫组化法分别从RNA、DNA及蛋白质水平检测乳腺标本是否表达EBV，以避免假阴性。在乳腺间质细胞中含有丰富的淋巴细胞，如EBV为淋巴细胞表达则检测结果可出现假阳性。DNA层面检测结果：PCR法仅在22例乳腺癌标本中为阳性。采用ISH法在100标本中复检EBV DNA时，表达均为阴性。采用LCM PCR检测22例PCR扩增阳性标本的上皮细胞和间质淋巴细胞，仅在间质细胞中扩增出EBV DNA，癌组织无EBV DNA表达。RNA及蛋白质层面：EBV RNA 探针的ISH 法检测及免疫组化法检测所有标本，结果为阴性。
综上所述，该实验通过多种检测方法，从多层面证实该次试验中选取的衡阳地区的标本中，乳腺癌发生、发展与EBV感染无关。该实验的标本均为衡阳地区，不除外其他地区乳腺癌与EBV 可能有相关性。
参考文献
[1] Horiuchi K，Mishima K，Ohsawa M，et al. Carcinoma of stomachand breast with lymphoid stroma： localisation of Epstein-Barr virus[J].J Clin Pathol，1994，47（6）：538-540.
[2] Baltzell K，Buehring G C，Krishnamurthy S，et al.Epstein-Barrvirus is seldom found in mammary epithelium of breast cancer tissueusing in situ molecular methods[J].Breast Cancer Res Treat，2011，132（1）：267-274.
关键词：乳腺肿瘤 EB病毒聚合酶链反应 原位杂交免疫组织化学
中图分类号：R36 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2017）06（b）-0211-02
EBV与鼻咽癌、淋巴瘤及胃癌等恶性肿瘤的发生和进展都有密切关系，被认为是人类肿瘤病毒之一。乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤。近年来EBV感染被认为是导致乳腺癌发生的一个易感因素。该文将收集衡阳地区病人乳腺良、恶性病变组织，研究衡阳地区乳腺癌的发生是否与EBV感染有直接关系，为防治乳腺癌寻求一条新途径。
1 材料
材料收集2015—2016年在衡阳市南华大学附属南华医院收集乳腺病变组织100例，其中良性病变31例、不典型增生3例、原位癌5例、乳腺浸润癌61例。
2 方法
（1）用PCR方法扩增LMP-1基因。
（2）CM PCR法检测EBVDNA。
（3）原位杂交法检测标本中的EBVDNA及EBV RNA。
（4）免疫组化检测乳腺病变组织EBV的LMP1蛋白表达。
3 结果
3.1 检测乳腺病变组织中EBV DNA
3.1.1 PCR
100例乳腺良、恶性病变标本进行PCR扩增，22例乳腺癌标本中扩增出EBV DNA（如图1），其余的乳腺纤维腺瘤及原位癌等标本中均未检出。
3.1.2 LCM PCR检测
22例阴性样本的乳腺上皮细胞和间质细胞均未检测到EBVDNA；22例阳性样本中仅在乳腺间质细胞中扩增出EBV DNA，乳腺癌细胞中未检测到EBV DNA。
3.1.3 ISH检测
在所有病变组织中均未检测到阳性杂交信号（如图2）。
3.2 检测乳腺病变组织中EBV RNA
在61例乳腺癌标本中均未检测到EBV的小RNA的表达，结果为阴性。
3.3 乳腺病变组织中EBV LMP1 的表达
采用免疫组化法检测EBV 潜伏膜蛋白LMP1 在100 例乳腺良、恶性病变组织中的表达情况，结果均呈阴性。
乳腺癌扩增结果：阴性
1、3、5 EBV DNA阳性
2、4、6 EBV DNA阴性
4 讨论
自1994年Horiuchi等[1]首次采用PCR在乳腺癌中检测到，EBV与乳腺癌发病是否存在相关系引起了学者们极大的兴趣，也开展了大量试验[2]。但由于实验材料处理方式不同以及检测方法的差异，无法得出一致结论，EBV与乳腺癌发生、发展是否相关成为一个令人困惑的问题。
该实验在设计时用原位杂交技术、PCR法及免疫组化法分别从RNA、DNA及蛋白质水平检测乳腺标本是否表达EBV，以避免假阴性。在乳腺间质细胞中含有丰富的淋巴细胞，如EBV为淋巴细胞表达则检测结果可出现假阳性。DNA层面检测结果：PCR法仅在22例乳腺癌标本中为阳性。采用ISH法在100标本中复检EBV DNA时，表达均为阴性。采用LCM PCR检测22例PCR扩增阳性标本的上皮细胞和间质淋巴细胞，仅在间质细胞中扩增出EBV DNA，癌组织无EBV DNA表达。RNA及蛋白质层面：EBV RNA 探针的ISH 法检测及免疫组化法检测所有标本，结果为阴性。
综上所述，该实验通过多种检测方法，从多层面证实该次试验中选取的衡阳地区的标本中，乳腺癌发生、发展与EBV感染无关。该实验的标本均为衡阳地区，不除外其他地区乳腺癌与EBV 可能有相关性。
参考文献
[1] Horiuchi K，Mishima K，Ohsawa M，et al. Carcinoma of stomachand breast with lymphoid stroma： localisation of Epstein-Barr virus[J].J Clin Pathol，1994，47（6）：538-540.
[2] Baltzell K，Buehring G C，Krishnamurthy S，et al.Epstein-Barrvirus is seldom found in mammary epithelium of breast cancer tissueusing in situ molecular methods[J].Breast Cancer Res Treat，2011，132（1）：267-274.