保肺颗粒祛痰、平喘、止咳、抗炎作用的药效学研究

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  摘要 目的:研究保肺顆粒的止咳、平喘、祛痰、抗炎作用。方法:通过小鼠酚红分泌实验观察其祛痰作用、通过磷酸组胺引起豚鼠的哮喘反应,观察其平喘作用、通过SO2引起的小鼠咳嗽反应,观察其止咳作用、通过二甲苯致小鼠耳廓肿法,观察其抗炎作用、通过角叉菜胶致大鼠足趾肿胀法,观察其抗炎作用。结果:对小鼠耳廓肿炎性反应模型的实验表明:保肺颗粒高、中、低剂量均能显著抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀,其肿胀度、肿胀率显著降低。对小鼠的祛痰(气管段酚红法)实验表明:保肺颗粒高、中、低剂量均能增加小鼠酚红排出量。对豚鼠的平喘(喷雾致喘法)实验表明:保肺颗粒高剂量能明显提高磷酸组胺引起的豚鼠哮喘潜伏期延长率,中、低剂量也可提高豚鼠哮喘潜伏期延长率,但差异无统计学意义。对小鼠的止咳(二氧化硫引咳法)实验表明:保肺颗粒高、中、低剂量均能明显延长SO2引起的小鼠咳嗽潜伏期;高、中剂量能明显减少2 min内咳嗽次数;保肺颗粒高、低剂量能明显延长枸橼酸引起的豚鼠咳嗽潜伏期,能明显减少5 min内咳嗽次数,潜伏期延长率有明显提高。结论:保肺颗粒具有较好的祛痰、平喘、止咳、抗炎作用。
  关键词 保肺颗粒;药效学研究;祛痰;平喘;止咳;抗炎
  Abstract Objective:To study the expectorant, antiasthmatic, antitussive, and antiinflammatory effects of Baofei Granules. Methods:The mice phenolsulfonphthalein excretion method was used to observe the expectorant effects. The guinea pigs asthma induced by histamine phosphate method was used to observe the antiasthmatic effects. The antitussive effects of the cough reaction in mice caused by SO2, and the anti-inflammatory effects of the auricle swelling caused by xylene, and the anti-inflammatory effects of the rat toe swell method induced by carrageenan were observed. Results:Experiments on mice auricular swelling inflammation model showed the high, medium and low dose groups of Baofei Granules could significantly inhibit the swelling of mice ears caused by xylene, and its swelling degree and swelling rate were significantly reduced; the expectorant(tracheal phenol red method)experiments on mice showed that Baofei Granules can increase the excretion of phenol red in high, medium and low doses. Anti-asthmatic(guinea-spray method)experiments on guinea pigs showed that high doses of Baofei Granules can significantly increase the prolongation rate of guinea pig asthma caused by histamine phosphate, and low and medium doses can also increase the prolongation rate of guinea pig asthma latency, but there was no statistical difference. The relieving cough(sulfur dioxide cough method)experiment on mice showed that high, medium and low doses of Baofei Granule can significantly prolong the incubation period of cough caused by SO2 in mice; high and medium doses can significantly reduce the number of coughs in 2 minutes; high and low Baofei Granules can significantly prolong the incubation period of guinea pig cough caused by citrate, can significantly reduce the number of coughs within 5 minutes, and the prolongation rate of incubation period has been significantly improved. Conclusion:Baofei Granules has significant expectorant, antiasthmatic, antitussive, and antiinflammatory effects.   Keywords Baofei Granules; Pharmacodynamics research; Expectorant; Antiasthmatic; Antitussive; Anti-inflammatory
  中图分类号:R285.5文献标识码:Adoi:10.3969/j.issn.1673-7202.2020.12.011
  大气污染是目前广受重视的问题,PM2.5细小颗粒可直接入侵呼吸系统,造成起到和肺内的炎性反应及慢性损伤[1],并能诱发出现呼吸衰竭等多系统疾病危及生命,是高发病率、高病死率疾病,极为凶险[2-3]。大量研究证明中药对慢性阻塞性肺疾病(Chronic Obstructive Pulmonary Disease,COPD)有明显的改善作用[4-6]。保肺颗粒处方为多年临床经验方,由浙贝母、炙黄芪、酒黄精、党参、炒白术、茯苓、地龙、姜厚朴、陈皮等制成,具有补肺健脾、止咳化痰平喘,用于治疗肺脾气虚症的COPD,为了进一步验证其临床药理作用,本研究分别对其进行了祛痰、平喘、止咳和抗炎的药效作用研究。
  1 材料与方法
  1.1 材料
  1.1.1 动物 KM小鼠,SPF级,雌雄各半,体质量18~20 g,动物质量合格证号:41003100002168;SD大鼠,SPF级,雄,体质量130~150 g,200~300 g,动物质量合格证号:No.41003100001797。均购自河南省实验动物中心,许可证号:SCXK(豫)2015-0004。幼年豚鼠,雌雄各半,体质量小于200 g,成年豚鼠,雌雄兼用,体質量400 g左右,购自华兰生物疫苗有限公司,许可证号:SCXK(豫)2010-0001,动物质量合格证号:No.41001700001651。受试动物引进后在河南省食品药品检验所SPF级动物房适应性生长1周,许可证号:SYXK(豫)2015-0009。饲养环境:河南省食品药品检验所SPF级动物房,许可证号:SYXK(豫)2015-0009。环境温度(23±2)℃,湿度50%~65%,12 h光照明暗交替,良好通风。动物分笼饲养于消毒塑料盒内,每笼3~4只,自由饮水。饲料:实验动物全价营养饲料,购自河南省实验动物中心,许可证号:SCXK(豫)2010-0002,饲料营养质量检测报告证明为合格。经121 ℃、15 min湿热灭菌,干燥后备用。饮水:纯化水,当日自制。
  1.1.2 药物 保肺颗粒(河南中医学院一附院制剂室,批号:131103),每克颗粒相当于生药3.375 g。保存条件:4 ℃冷藏密闭保存,实验时放置至室温备用,生产单位:河南中医学院一附院制剂室。羧甲基纤维素钠(上海化学试剂站分装厂,批号:921224);羧甲司坦片(白云山汤明东泰药业有限责任公司,批号:141002);急支糖浆(太极集团重庆涪陵制药厂有限公司,批号:141011930371);氨茶碱片(海南制药厂有限公司制药一厂,批号:141201);咳喘宁口服液(南京先声东元制药有限公司,批号:40-140906);氢溴酸右美沙芬(广州白云山光华制药股份有限公司,批号:T40067);布洛芬缓释胶囊(中美天津史克制药有限公司,批号:14110665);银黄口服液(陕西白鹿制药股份有限公司,批号:141131)。
  1.1.3 试剂与仪器 酚红(天津市光复精细化工研究所,批号:20141028);氢氧化钠(天津市风船化学试剂科技有限公司,批号:20121008);磷酸组胺(中国食品药品检定研究院,批号:150510-201313);二甲苯(天津市风船化学试剂科技有限公司,批号:20120208);角叉菜胶(Aladdin Industrial Corporation,德国,批号:H1506079)。电子天平(德国Sartorius公司,型号:CP225D),电子天平(瑞士METTLER TOLEDO仪器有限公司,型号:PB4002-S);UV-1800紫外分光光度计,岛津生产;403C压缩空气雾化器,江苏鱼跃医疗设备有限公司(出品);多导生理仪,澳大利亚埃德公司;PSF2000三键电子数显卡尺,桂林广陆数字测控股份有限公司。
  1.2 方法
  1.2.1 小鼠酚红分泌量试验 取SPF级KM小鼠72只,雌雄各半,体质量18~22 g,按体质量随机分为6组,即空白对照组(0.5%CMCNa)、保肺颗粒高、中、低剂量组(43.8、21.9、11.0 g生药/kg),羧甲司坦组(1 g/kg)和急支糖浆组(20 mL/kg),每组12只。给药1次/d,连续给药7 d,最后1次给药后30 min,腹腔注射酚红饱和溶液0.1 mL/10 g,0.5 h后处死动物,分离气管段(自甲状软骨至气管分支处),放入盛有2 mL生理盐水的试管中,加入1 mol/L氢氧化钠0.1 mL,于546 nm处测吸收度。用5%酚红溶液做出标准曲线,根据标准曲线计算酚红排出量[7-8]。
  1.2.2 对豚鼠平喘作用的影响
  1.2.2.1 试验用动物预选 实验前1 d选体质量小于200 g豚鼠若干只,分别置容积为约5 L玻璃干燥器内,利用压缩雾化器喷入1 mg/mL的磷酸组胺30 s,动物在吸入以上药液后经过一定的潜伏期,即产生哮喘反应,“哮喘”反应按程序可分为四级,Ⅰ级呼吸加速,Ⅱ级呼吸困难,Ⅲ级抽搐,Ⅳ级跌倒。记录喷雾开始至症状出现的时间抽搐为准作为潜伏时间跌倒时间,此为给药前跌倒时间。多数动物在90 s以内即可出现Ⅲ级或Ⅳ级反应;一般不超过150 s,超过150 s者可以认为不敏感,不予选用。动物一出现抽搐,立即取出动物,必要时辅以人工呼吸,以免动物因窒息而死亡[9]。
  1.2.2.2 次日将预选过的豚鼠以跌倒时间随机分为6组,即空白对照组(0.5%CMCNa),阳性药组氨茶碱(60 mg/kg),咳喘宁口服液组(5 mL/kg原液),保肺颗粒高、中、低剂量组(21.9、11.0、5.5 g生药/kg),每组10只,雌雄各半灌胃给药。连续灌胃给药7 d,最后1次给药后30 min,将豚鼠分别放入同预选时条件一致玻璃容器内。记录喷雾开始至症状出现的时间(以抽搐为标准)作为潜伏时间,此为药后跌倒时间。观察360 s,不跌倒者潜伏期以360 s计。豚鼠哮喘潜伏期延长率按照公式计算:   潜伏期延长率(%)=给药后跌倒时间给药前跌倒时间×100%
  1.2.3 对小鼠止咳作用的影响 取小鼠,雌雄各半,体质量18~20 g,按体质量均分为6组,每组14只。按体质量随机分为6组,即空白对照组(0.5%CMCNa)、保肺颗粒高、中、低剂量组(43.8、21.9、11.0 g生药/kg)、氢溴酸右美沙芬(20 mg/mL)、急支糖浆(10 mL/kg),给药1次/d,连续给药7 d,最后1次给药1 h后,迅即将小鼠放入充满SO2烧杯内,观察并记录小鼠咳嗽潜伏期(从小鼠放入钟罩或烧杯到出现第1声咳嗽的时间)及2 min内的咳嗽次数,比较实验组与对照组之间的差异。咳嗽潜伏期延长,表明有止咳作用[10]。
  止咳率(%)=给药组咳嗽反应时间对照组咳嗽反应时间×100%
  1.2.4 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 取体质量18~22 g雄性SPF级KM小鼠,按体质量随机分为6组,即空白对照组(0.5%CMCNa)、布洛芬组(180 m/kg)、保肺颗粒高、中、低剂量组(43.8、21.9、11.0 g生药/kg)、每组13只。各组药物灌胃,给药容量0.2 mL/10 g,1次/d,连续给药7 d。末次给药1 h后,给小鼠右耳双面涂以二甲苯0.04 mL/只,左耳对照,4 h后处死动物,用直径6 mm打孔器将双耳同部位等面积切下,精确称重,按下式计算肿胀度、肿胀率及肿胀抑制率[11-12]。
  肿胀度=右耳片重-左耳片重
  肿胀率(%)=右耳片重(g)-左耳片重(g)左耳片重(g)×100%
  抑制率(%)=空白组平均肿胀率(%)-给药组平均肿胀率(%)空白組平均肿胀率(%)×100%
  1.2.5 对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响 取SD大鼠,雄,60只,体质量130~150 g,按体质量随机分为6组,即空白对照组(0.5%CMCNa),阳性药组布洛芬(100 mg/kg),银黄口服液组(10 mL/kg原液),保肺颗粒高、中、低剂量组(21.9、11.0、5.5 g生药/kg),每组10只,灌胃给药,1次/d,给药容量1 mL/100 g体质量,连续给药7 d。末次给药后30 min,除空白对照组外,其他各组以1%的角叉菜胶为致炎剂,分别在大鼠右后肢足跖皮下注射0.1 mL。致炎前测定各组大鼠右后跖的正常厚度,致炎后30 min、1 h、2 h、4 h、6 h、再测定各组大鼠右后跖的厚度。按下式计算肿胀率及抑制率[13-14]。
  肿胀率(%)=致炎后足趾厚度(mm)-致炎前足趾厚度(mm)致炎前足趾厚度(mm)×100%
  抑制率(%)=空白组肿胀率(%)-给药组肿胀率(%)空白组肿胀率(%)×100%
  1.3 统计学方法 采用SPSS 16.0统计软件进行统计学分析,结果以均数±标准差(±s)表示。组间差异用单因素方差分析进行统计学分析。以P<0.05为差异有统计学意义。
  2 结果
  2.1 对小鼠酚红分泌量的影响 与空白对照组比较,保肺颗粒高、中、低剂量组、羧甲司坦组、急支糖浆组增加小鼠酚红排出量差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。见表1。
  2.2 对哮喘豚鼠模型平喘作用的影响 与模型对照组比较,保肺颗粒高剂量组豚鼠给药后跌倒时间延长,哮喘潜伏期延长率显著升高(P<0.05);中剂量组、低剂量组也可延长豚鼠给药后跌倒时间,提高磷酸组胺引起的豚鼠哮喘潜伏期延长率,但差异无统计学意义;0.06 g/kg氨茶碱和5 mL/kg的咳喘宁口服液可延长豚鼠给药后跌倒时间,提高磷酸组胺引起的豚鼠哮喘潜伏期延长率,且差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。
  2.3 对小鼠止咳作用的影响 观察记录小鼠咳嗽潜伏期(从小鼠放入钟罩或烧杯到出现第1声咳嗽的时间)及2 min内的咳嗽次数,并计算止咳率。与模型对照组比较,保肺颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组小鼠咳嗽潜伏期明显延长,高、中剂量组2 min内咳嗽次数明显减少(P<0.01)。0.02 g/kg的氢溴酸右美沙芬组和10 mL/kg急支糖浆组小鼠咳嗽潜伏期明显延长,2 min内咳嗽次数明显减少(P<0.01)。见表3。
  2.4 对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响 观察记录小鼠给药前及末次给药前体质量,致炎后小鼠左右耳片重量,计算肿胀度、肿胀率及抑制率。与模型对照组比较,各组给药前和末次给药前动物体质量差异无统计学意义(P>0.05)。与模型对照组比较,保肺颗粒高、中、低剂量组和布洛芬组小鼠耳肿胀度、肿胀率显著降低(P<0.05);银黄口服液肿胀度、肿胀率降低,差异无统计学意义(P>0.05)。见表4。
  2.5 对角叉菜胶致大鼠足趾肿胀的影响 观察记录各组大鼠致炎前和致炎后30 min、1 h、2 h、4 h、6 h大鼠右后跖肿胀率及抑制率。与模型对照组比较,足跖肿胀炎性反应模型大鼠给药前及末次给药前各组体质量差异无统计学意义(P>0.05)。大鼠皮下足跖注射1%的角叉菜胶致炎后,模型对照组逐渐肿胀,至2~4 h肿胀率最高,到6 h肿胀率下降;与模型对照组比较,保肺颗粒高、中、低剂量组和布洛芬组在致炎后30 min、1 h、2 h、4 h、6 h均能抑制大鼠足跖肿胀,其肿胀率显著降低(P<0.05或P<0.01);银黄口服液对致炎后30 min、1 h、2 h引起的大鼠足跖肿胀抑制不明显,肿胀率差异无统计学意义,致炎后4 h和6 h肿胀率明显下降(P<0.05或P<0.01)。见表5、6。
  3 讨论
  随着人们生存空气的污染、气候的变化、吸烟以及人口的老龄化,呼吸系统疾病发病率逐年增高,严重威胁我国居民的健康。其中,COPD是一种常见、多发、高致残率和高致死率的慢性呼吸系统疾病,通常是由于暴露于有毒气体或颗粒导致的气道和(或)肺泡异常。常伴有咳嗽、痰多、气喘、炎性反应等症状[15-16]。据世界卫生组织统计,目前慢阻肺为世界第四大致死原因,到2030年可能上升为世界第3大致死原因[17]。中医认为COPD日久不愈,肺气亏虚,根据五行相生关系,子病及母,肺气虚可致中州脾土虚弱,则脾失健运,气血生化乏源,故日久可致脾肺俱虚,治宜培土生金[18]。因脾气虚致肺气虚,出现咳、喘、痰等症,其标在肺,而其本在脾,应治其本,养护后天之气[19]。   应用中药化痰益肺汤治疗本病,方中浙贝母、地龙清热,去久病由瘀化热之因;酒黄精滋阴润肺,以防化燥伤阴之症;浙贝母、陈皮、姜厚朴化痰泻肺平喘、理气降逆止呕;茯苓健脾宁心,炒白术、党参、酒黄精健脾益气[20],以防金病伤及脾土。由几味主药的药效不难发现,多具健脾功效,“脾能助肺益气”,几味中药联用相互协同,相互资助,则气得以生,卫表得固,外邪无以入侵,即“正气存内,邪不可干”,从而起到祛痰、平喘、止咳和抗炎作用。
  保肺颗粒高、中、低剂量均能增加小鼠气管酚红排出量,表明保肺颗粒具有较好的祛痰作用,高、中剂量尤为显著。保肺颗粒高、中、低剂量均能有效抑制二甲苯引起的小鼠耳肿胀;保肺颗粒高、中、低剂量均能有效抑制角叉菜胶引起的大鼠足跖肿胀,致炎后0.5~1 h中剂量抑制率显著,2 h后高、中、低剂量抑制均显著,表明保肺颗粒具有良好的抗炎作用,表明保肺颗粒具有良好的抗炎作用。保肺颗粒高剂量可延长豚鼠给药后跌倒时间,提高磷酸组胺引起的豚鼠哮喘的潜伏期延长率,低剂量和中剂量也可较好的延长豚鼠给药后跌倒时间,提高潜伏期延长率。表明保肺颗粒有较好的平喘作用。保肺颗粒高、中、低剂量均能明显延长SO2引起的小鼠咳嗽潜伏期;高、中剂量能明显减少2 min内咳嗽次数;表明保肺颗粒有较好的止咳效果。
  上述研究显示,保肺颗粒具有较好的祛痰、平喘、止咳和抗炎作用,并且药效由于或等同于阳性化学对照药,这不仅为保肺颗粒临床应用提供了药效学实验数据支持,同时同时颗粒剂具有剂型优势,携带服用方便,并且可以避免微生物污染,是一种开发前景良好、具有较好的临床应用价值的中药復方制剂。
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  (2020-03-13收稿 责任编辑:王明)
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摘要 目的:探討及分析袁少英教授治疗慢性前列腺炎的用药经验。方法:采用中医传承辅助平台(V2.5)统计经袁师诊断为慢性前列腺炎且疗效良好的病历处方,统计药物频次、药物四气五味归经、常用药对频次,并基于关联规则分析处方规律,聚类形成核心治疗组合及药物新处方,探讨慢性前列腺炎的病因病机。结果:共纳入350例慢性前列腺炎病历处方,经统计袁师临床上常以活血化瘀药、清热药及补虚药为主,药物大多归属肝脾肾三经
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