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目的：对高效液相色谱（HPLC）法测定连翘中连翘苷含量的结果进行不确定度分析，明确影响不确定度的因素。方法：依据《中华人民共和国药典》2015年版一部连翘含量测定方法，通过分析测量过程，明确不确定度来源，量化不确定度分量，计算合成不确定度并确定测量结果在95％置信区间（95％CI）下的扩展不确定度。结果：采用HPLC法测定连翘中连翘苷含量的扩展不确定度为0．01％。结论：HPLC法测定连翘药材中连翘苷含量的不确定度主要由对照品的称量引入。