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摘 要：本实验采用超声波提取法对白花蛇舌草中的多糖进行提取，以多糖得率为评价指标，采用单因素试验对料液比、提取时间、提取温度、超声功率进行研究，并进行验证，优选最佳提取工艺。结果表明，提取多糖的最佳工艺为料液比1：6，超声功率110w，提度60℃，提取60min，在最佳条件下连续进行3次提取，多糖得率可达3.42%。
关键词：白花蛇舌草;多糖提取;超声波法
1仪器与试药
仪器：Branson2200超声波清洗仪（上海方正电子电器有限公司）;BT-125D电子分析天平（普林巴克科学仪器有限公司）;TU-1810紫外可见分光光度计（北京普新通用仪器有限责任公司）;旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。
试药：白花蛇舌草，购于陕西康誉药业有限公司，经鉴定为茜草科草本植物;葡萄糖对照品（批号2019015，北京坛墨质检科技有限公司）;山东旭晨化工科技有限公司）;无水碳酸氢钠（天津天力化学试剂有限公司）;乙醇、正丁醇、无水乙醇等为分析纯。
2 研究方法
2.1对照品溶液的配制
取燥至不含结晶水的糖对照品约10mg，精定，于10ml的容瓶中，加入，溶解，定容至刻度，即得0.1mg/ml的葡萄糖对照品溶液。
2.2苯酚溶液的制备
取100g苯酚，加0.1g铝片和0.05g氢氧化钠，加热蒸馏，收集182℃的馏分，取此馏分5ml加水溶解并稀释至100ml，摇匀，即得5%的苯酚溶液，置棕色瓶内备用。
2.3最大吸收波长的确定
精密吸取1ml葡萄糖对照品溶液置于10ml容量瓶中，立即加入浓硫酸5.0ml，6%苯酚溶液1.0ml，静置20min，摇匀，放至室温，进行测定，空白试验为蒸馏水，在200～600nm波长范围内扫描，测得在488nm处出现最大吸收。
2.4标准曲线绘制
分别精密吸取0ml，0.1ml，0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml的葡萄糖对照品溶液，置于10ml的瓶中，加水定容至刻度，摇匀，滤过，分别取续滤液1.0ml至试管中，再加入浓硫酸5.0ml，苯酚溶液1ml，放置室温，以0ml容量瓶为空白对照，在488nm处测吸光度，以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线为y=10.971x+0.0042，在0.01～0.10mg/ml范围内线性关系良好，R2=0.9996
2.5多糖的提取方法
称取白花蛇舌草适量烘干，加一定量水，采用提取2次，滤过，滤液浓缩至原体积一半，加2倍量乙醇，置至沉淀析出，抽滤，沉淀加15ml的水使溶全，加-正混合溶液，充分振摇，除去含有的蛋白，离心，用2mg/ml的氢氧化钠调节上清液的PH等于7，离心后，加入乙醇，此时乙醇为原来的2倍量，析出沉淀，将沉淀物用等真燥至重，即得白舌草干多糖。
2.6多糖得率计算
按2.5下工艺流程制备干多糖，将干多糖置于100mL容量瓶中溶解后定容，得到多糖溶液。并采用硫酸-苯酚顯色法进行显色。在490nm出测定吸光度值，通过标准曲线计算浓度。
Y=（C×V×D）×10-6/m×100%
其中，Y为多糖得率;C为多糖浓度;D为稀释倍数;m为半枝莲质量;V为配置溶液的体积。
3提取工艺研究
3.1料液比对多糖得率的影响
在确定110w，提取60min，提度60℃三者保持不变时，取白花蛇舌草，分别考察料液比为1：4，1：5，1：6，1：7，1：8对多糖得率的影响。按照上述实验方法结果得，多糖得率随着料液比先增加后逐渐减少。故选择料液比为1：4，1：6。
3.2提取时间对多糖得率的影响
在比为1：6，60℃，超率110w三者不变时，取白花蛇舌草，考察超声提取时间为50，60，70，80，90min时，按照上述的实验方法计算多糖得率，结果在提取时间为60min时，多糖得率最大，随着时间延长，依次降低故提取时间为60min。
3.3提取温度对多糖得率的影响
在确定1：6，110w，为60min三者不变时，取白花蛇舌草，考察提取温度为50，60，70，80，90℃时，多糖得率的情况，按照上述的实验方法计算多糖得率，结果可见：随的升高，多糖先升高，再逐渐下降，故提取温度为60℃。
3.4超声功率对多糖得率的影响
在确定1：6，60min，提度60℃三者不变时，取白花蛇舌草，考察超声功率为70，80，90，100，110w时，多糖得率的情况，按照上述的实验方法计算多糖得率，结果可见：随超声功率增加而增大，所以，超声功率越大，多糖的得率越高，故超声功率水平为110w。
3.5最佳提取工艺验证
精密称取白花蛇舌草药材10g，根据单因素试验确定最佳水平进行提取，平行进行3次，按照“2.6”项下方法计算多糖得率，结果在最佳条件下，白花蛇舌草多糖得率平均为3.42%。
4结论
本实验在提取过程中为了减少干扰，首先采用乙醇去除所含的单糖，低聚糖及苷类等干扰性成分，采用了单因素试验考察影响白花蛇舌草多糖得率的因素并得到各因素的最高水平并进行验证，最后得在提取60℃、提60min、料比1：6、超率110W，率最高为3.42%，实验过程中采用的超声波法在实验室中简单易行，操作方法简单，为白花蛇舌草多糖的提取工艺提供了一定的理论基础，为其在药理作用和临床应用研究也提供了帮助。
参考文献
[1]孟延发，胡晓愚，孟雪琴.白花蛇舌草多糖的研究[J].兰州大学学报，2009（4）
[2]杨培民，代龙，魏永利.中药白花蛇舌草研究进展[J].现代中药研究与实践，2009（4）
[3]宝炉丹，徐国防，马郑，等.柱前衍生化HPLC分析白花蛇舌草多糖中单糖的组成[J].中成药.2008（3）
[4]朱智勇.超声提取白花蛇舌草多糖的工艺研究[J].内蒙古中医药，2010
基金项目：本文系2019年大学生创新创业训练计划项目省级立项项目，项目名称为白花蛇舌草中多酚类成分提取的工艺优化及抗氧化活性研究，项目编号为S201913123040;
作者简介：李思月，陕西国际商贸学院医药学院药学2016级
通讯作者：王青，讲师，主要从事中药化学与质量控制的教学与科研工作
关键词：白花蛇舌草;多糖提取;超声波法
1仪器与试药
仪器：Branson2200超声波清洗仪（上海方正电子电器有限公司）;BT-125D电子分析天平（普林巴克科学仪器有限公司）;TU-1810紫外可见分光光度计（北京普新通用仪器有限责任公司）;旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。
试药：白花蛇舌草，购于陕西康誉药业有限公司，经鉴定为茜草科草本植物;葡萄糖对照品（批号2019015，北京坛墨质检科技有限公司）;山东旭晨化工科技有限公司）;无水碳酸氢钠（天津天力化学试剂有限公司）;乙醇、正丁醇、无水乙醇等为分析纯。
2 研究方法
2.1对照品溶液的配制
取燥至不含结晶水的糖对照品约10mg，精定，于10ml的容瓶中，加入，溶解，定容至刻度，即得0.1mg/ml的葡萄糖对照品溶液。
2.2苯酚溶液的制备
取100g苯酚，加0.1g铝片和0.05g氢氧化钠，加热蒸馏，收集182℃的馏分，取此馏分5ml加水溶解并稀释至100ml，摇匀，即得5%的苯酚溶液，置棕色瓶内备用。
2.3最大吸收波长的确定
精密吸取1ml葡萄糖对照品溶液置于10ml容量瓶中，立即加入浓硫酸5.0ml，6%苯酚溶液1.0ml，静置20min，摇匀，放至室温，进行测定，空白试验为蒸馏水，在200～600nm波长范围内扫描，测得在488nm处出现最大吸收。
2.4标准曲线绘制
分别精密吸取0ml，0.1ml，0.2ml，0.4ml，0.6ml，0.8ml，1.0ml的葡萄糖对照品溶液，置于10ml的瓶中，加水定容至刻度，摇匀，滤过，分别取续滤液1.0ml至试管中，再加入浓硫酸5.0ml，苯酚溶液1ml，放置室温，以0ml容量瓶为空白对照，在488nm处测吸光度，以对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线为y=10.971x+0.0042，在0.01～0.10mg/ml范围内线性关系良好，R2=0.9996
2.5多糖的提取方法
称取白花蛇舌草适量烘干，加一定量水，采用提取2次，滤过，滤液浓缩至原体积一半，加2倍量乙醇，置至沉淀析出，抽滤，沉淀加15ml的水使溶全，加-正混合溶液，充分振摇，除去含有的蛋白，离心，用2mg/ml的氢氧化钠调节上清液的PH等于7，离心后，加入乙醇，此时乙醇为原来的2倍量，析出沉淀，将沉淀物用等真燥至重，即得白舌草干多糖。
2.6多糖得率计算
按2.5下工艺流程制备干多糖，将干多糖置于100mL容量瓶中溶解后定容，得到多糖溶液。并采用硫酸-苯酚顯色法进行显色。在490nm出测定吸光度值，通过标准曲线计算浓度。
Y=（C×V×D）×10-6/m×100%
其中，Y为多糖得率;C为多糖浓度;D为稀释倍数;m为半枝莲质量;V为配置溶液的体积。
3提取工艺研究
3.1料液比对多糖得率的影响
在确定110w，提取60min，提度60℃三者保持不变时，取白花蛇舌草，分别考察料液比为1：4，1：5，1：6，1：7，1：8对多糖得率的影响。按照上述实验方法结果得，多糖得率随着料液比先增加后逐渐减少。故选择料液比为1：4，1：6。
3.2提取时间对多糖得率的影响
在比为1：6，60℃，超率110w三者不变时，取白花蛇舌草，考察超声提取时间为50，60，70，80，90min时，按照上述的实验方法计算多糖得率，结果在提取时间为60min时，多糖得率最大，随着时间延长，依次降低故提取时间为60min。
3.3提取温度对多糖得率的影响
在确定1：6，110w，为60min三者不变时，取白花蛇舌草，考察提取温度为50，60，70，80，90℃时，多糖得率的情况，按照上述的实验方法计算多糖得率，结果可见：随的升高，多糖先升高，再逐渐下降，故提取温度为60℃。
3.4超声功率对多糖得率的影响
在确定1：6，60min，提度60℃三者不变时，取白花蛇舌草，考察超声功率为70，80，90，100，110w时，多糖得率的情况，按照上述的实验方法计算多糖得率，结果可见：随超声功率增加而增大，所以，超声功率越大，多糖的得率越高，故超声功率水平为110w。
3.5最佳提取工艺验证
精密称取白花蛇舌草药材10g，根据单因素试验确定最佳水平进行提取，平行进行3次，按照“2.6”项下方法计算多糖得率，结果在最佳条件下，白花蛇舌草多糖得率平均为3.42%。
4结论
本实验在提取过程中为了减少干扰，首先采用乙醇去除所含的单糖，低聚糖及苷类等干扰性成分，采用了单因素试验考察影响白花蛇舌草多糖得率的因素并得到各因素的最高水平并进行验证，最后得在提取60℃、提60min、料比1：6、超率110W，率最高为3.42%，实验过程中采用的超声波法在实验室中简单易行，操作方法简单，为白花蛇舌草多糖的提取工艺提供了一定的理论基础，为其在药理作用和临床应用研究也提供了帮助。
参考文献
[1]孟延发，胡晓愚，孟雪琴.白花蛇舌草多糖的研究[J].兰州大学学报，2009（4）
[2]杨培民，代龙，魏永利.中药白花蛇舌草研究进展[J].现代中药研究与实践，2009（4）
[3]宝炉丹，徐国防，马郑，等.柱前衍生化HPLC分析白花蛇舌草多糖中单糖的组成[J].中成药.2008（3）
[4]朱智勇.超声提取白花蛇舌草多糖的工艺研究[J].内蒙古中医药，2010
基金项目：本文系2019年大学生创新创业训练计划项目省级立项项目，项目名称为白花蛇舌草中多酚类成分提取的工艺优化及抗氧化活性研究，项目编号为S201913123040;
作者简介：李思月，陕西国际商贸学院医药学院药学2016级
通讯作者：王青，讲师，主要从事中药化学与质量控制的教学与科研工作