【摘 要】
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目的 探讨滑膜成纤维细胞（synovial fibroblast,SF）来源的外泌体中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对骨关节炎（OA）软骨细胞增殖、凋亡以及炎症反应的影响。方法 对获得HMGB1沉默稳转滑膜的成纤维细胞（滑膜成纤维细胞组）和ExoQuick-TC试剂盒处理后细胞（Exo组）提取上清液,用Western blotting检测两组HMGB1、CD63及CD81蛋白的表达。将软骨细胞H
【基金项目】
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苏州市科技计划发展项目（SYSD2019043）；
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目的 探讨滑膜成纤维细胞（synovial fibroblast,SF）来源的外泌体中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）对骨关节炎（OA）软骨细胞增殖、凋亡以及炎症反应的影响。方法 对获得HMGB1沉默稳转滑膜的成纤维细胞（滑膜成纤维细胞组）和ExoQuick-TC试剂盒处理后细胞（Exo组）提取上清液,用Western blotting检测两组HMGB1、CD63及CD81蛋白的表达。将软骨细胞HC-A分为空白对照组、IL-1β组（100 pg/ml IL-1β预刺激）和IL-1β+Exo组（100 pg/ml IL-1β预刺激+50μg/ml滑膜成纤维细胞来源的外泌体）,并使用实时定量PCR方法检测IL-6、TNF-α、MMP-1、MMP-13和COL2A1的mRNA水平。随后将IL-1β处理的软骨细胞分为IL-1β组、IL-1β+Exo组、IL-1β+Exo+NC-siRNA组和IL-1β+Exo+HMGB1-siRNA组。IL-1β+Exo+NC-siRNA组和IL-1β+Exo+HMGB1-siRNA组IL-1β处理的软骨细胞分别加入转染NC-siRNA或HMGB1-siRNA的滑膜成维细胞来源外泌体。采用CCK-8实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,以及实时定量PCR检测MMP-1、MMP-13、COL2A1 mRNA的表达。结果 与滑膜成纤维细胞组比较,Exo组外泌体标志物CD63、CD81以及HMGB1蛋白表达显著升高,即滑膜成纤维细胞来源的外泌体鉴定成功。与空白对照组比较,IL-1β组软骨细胞增殖能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,IL-6、TNF-α、MMP-1、MMP-13 mRNA表达水平均显著升高,COL2A1 mRNA表达水平显著降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。与IL-1β组比较,IL-1β+Exo组软骨细胞增殖能力显著增加,细胞凋亡明显抑制,IL-6、TNF-α、MMP-1、MMP-13mRNA的表达上调,COL2A1 mRNA的表达下调（均P ＜0.05）。与IL-1β+Exo+NC-siRNA组比较,IL-1β+Exo+HMGB1-siRNA组软骨细胞增殖能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,IL-6、TNF-α、MMP-1、MMP-13 mRNA表达水平显著升高,COL2A1 mRNA表达水平均显著降低（均P＜0.05）。结论 滑膜成纤维细胞来源的外泌体可通过HMGB1抑制软骨细胞炎症反应、软骨降解以及细胞凋亡。
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