烟草IMP分子标记体系的建立与优化

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为满足烟草遗传分析的需求,建立稳定的IMP标记扩增方法,对IMP分子标记体系进行了优化。以烟草DNA为模板,利用Li-cor4300凝胶分离系统,优化了模板、Mg2+、dNTP、聚合酶浓度等IRD荧光引物扩增反应体系主要参数,建立分析IMP标记的平台。结果显示,影响烟草荧光引物扩增反应最大的因素是dNTPs和引物浓度,反应体系对Mg2+浓度的要求较宽泛,同时,不同的引物对各因素的浓度要求也有差异。最终确定20μL反应体系中,模板DNA70ng,Mg2+浓度2.0mmol/L,dNTPs为0.2mmol/L
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