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目的
检测小鼠肠系膜淋巴结树突状细胞(MLNDC)上促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)及其受体CRFR1、CRFR2的表达,探讨CRF及其受体对MLNDC的表型改变的影响。
方法采用磁珠分选技术分离C57BL/6小鼠的MLNDC,以流式标记CD11c鉴定DC分选纯度,获得高纯度MLNDC后,RT-PCR检测其CRF、CRFR1与CRFR2的转录水平,免疫荧光双染法明确MLNDC表面CRFR1及CRFR2的表达。将MLNDC体外培养,予以CRF受体相应拮抗剂干预,流式细胞术观察DC表面分子变化。
结果流式细胞术检测显示经磁珠分选后,CD11c标记的树突状细胞阳性率为(80.12±6.34)%,锥虫蓝染色显示细胞活性>90%,MLNDC存在CRF、CRFR1与CRFR2 mRNA的表达,免疫荧光提示其表面存在CRFR1及CRFR2的表达,CRFR1拮抗剂Antalarmin(10 nmol/L)可以下调MLNDC表面共刺激分子CD86,而CRFR2拮抗剂Astressin 2B(10 nmol/L)可以上调MLNDC表面共刺激分子CD86。
结论体外分离的C57BL/6小鼠MLNDC自身存在CRF及其受体CRFR1和CRFR2的表达,并且该两种受体对MLNDC表型具有相反的作用。