高温中性蛋白酶基因的克隆及毕赤酵母表达研究

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对地衣芽孢杆菌XJT19503高温中性蛋白酶进行了克隆,并在毕赤酵母中进行了表达。以高温中性蛋白酶产生菌地衣芽孢杆菌XJT19503基因组DNA为模板,通过PCR扩增,获得高温中性蛋白酶(Tnp)基因的特异性片段,大小约为1kb。通过EcoRI、NotI双酶切后,将该基因连入毕赤表达载体pPIC9K,并整合到毕赤酵母SMD1168基因组中,构建的基因工程菌,进行甲醇诱导表达。结果表明,基因工程菌发酵72h,有最大酶活。为19U/mL;酶的最适作用温度为65℃。与原始酶的最适作用温度相符。证明研究成功克隆了
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