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大鼠胚胎成纤维细胞（REF）可以作为培养大鼠胚胎干细胞的滋养层．对REF进行分离、原代培养、冻存和有丝分裂抑制，得出如下结论：分离REF时使用组织块生长法优于胰酶消化法；应用血清含量〉40％、DMSO含量为20％的冻存缓冲液能在冻存时最大程度地降低REF所受的伤害；进行REF分裂抑制时使用丝裂霉素C处理的最适终浓度为3ug／m1．