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目的
探讨Myosin X对肺癌H1975细胞系放射敏感性调节及相关机制。
方法蛋白免疫印迹法检测肺癌细胞系中Myosin X表达量以获取实验对象。运用CRISPR/Cas9技术建立敲除Myosin X的H1975细胞系(KO组)和感染对照病毒的H1975细胞系(NC组)，并进行敲除效率验证。克隆形成实验及多靶单击模型检测两组细胞对射线敏感性差异。γ-H2AX焦点形成实验及RNAseq差异分析技术寻找可能参与Myonsin X介导的肺癌细胞系放射敏感性调节机制。
结果Myosin X在H1975细胞中表达量明显高于其他细胞系(P<0.01)。经鉴定成功构建了Myosin X sgRNA-Lenti-CRISPR v2慢病毒载体，嘌呤霉素筛选后得到Myosin X完全敲除的H1975(KO组)及对照组(NC组)细胞系。克隆形成实验证明相较于NC组，KO组对射线的敏感性更强(D0值从1.28 Gy下降至1.03 Gy，SF2从0.29下降至0.21，放射敏感性比为1.24)。γ-H2AX焦点形成实验显示照后1、6 h KO组形成的损伤焦点数均多于NC组(P<0.05)，RNAseq差异分析技术结果显示KO组ISLR蛋白表达明显低于NC组(P<0.05)。
结论敲除Myosin X可以增强肺癌H1975细胞的放射敏感性，其机制可能与干扰DNA双链损伤修复以及降低ISLR表达有关。