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目的探讨胎牛血清(FBS)传代培养诱导新生大鼠视网膜干细胞向视网膜神经节细胞(RGCs)分化的可能性,为视网膜细胞体外诱导研究提供新思路和新方法。方法本研究采用新生5 d的大鼠作为实验动物,来源于北京维通利华实验动物技术公司。采用贴壁培养法分离小鼠视网膜细胞的胰蛋白酶,在10%FBS的DMEM/F12培养基中传代培养,经过连续传代纯化细胞。通过免疫荧光法和逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)鉴定诱导细胞的分化情况。结果大鼠视网膜混合细胞原代培养24 h后,可见部分细胞开始贴壁、伸展,但仍有大量细胞悬浮。48 h换液时,可见大量细胞呈短梭形,分散贴壁生长。4 d后可见细胞呈集落样生长,具有典型的RSCs形态;7~10 d后细胞融合成片,可传代。传代后12 h内细胞贴壁,多呈长扁形,双极性,末端呈分枝状。传至第3代时,细胞生长最旺盛;传至第5代时,细胞生长减缓,形态趋于一致。免疫荧光鉴定表达蛋白的结果:(1)原代混合细胞:表达光感受器标志物及干细胞标志物Nestin,节细胞标志物Thy-1,视紫红质及Muller胶质细胞标志物谷氨酰氨合成酶。从荧光强度和数量可以看出,与本身细胞核染色密度相比,光感受细胞、节细胞和Muller胶质细胞的数量并不多,且存在大量表达阳性Nestin的RSCs;(2)高血清培养体系纯化的第5代细胞:细胞形态未发生改变,表达视网膜神经节细胞的标志物Thy-1、Nogo-R及Tuj1,均呈强阳性。RNA的含量为0.287μg/ml,RNA纯度为1.66。电泳结果:(1)第1代F1细胞PCR的结果:RPCs的标志物Nestin及Masushi为阳性,证明存在一定数量的RSCs。而成熟节细胞的标志物Thy-1为弱阳性,证明成熟RGCs细胞的含量不高。阳性对照的Actin为强阳性。(2)第5代F5细胞PCR的结果:RPCs的标志物Nestin及Masushi为弱阳性,证明残留的RSCs数量较低。而成熟节细胞的标志物Thy-1为强阳性,证明产生了大量的类节细胞。阳性对照的Actin为强阳性。大鼠视网膜混合细胞存在发育成熟的光感受器细胞、神经节细胞及胶质细胞,但细胞数量并不多,且存在一定数量的RSCs。经高血清贴壁诱导后,RSCs可分化为大量具有RGCs标志物的细胞。结论在体外分离的SD大鼠视网膜混合细胞中存在RSCs。通过FBS体系的传代诱导,可得到具有RGCs表型的细胞。