明串珠菌电转化的优化

来源 :中国调味品 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jhcjsc
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为了构建食品级基因工程受体菌,课题对明串珠菌的电转化条件进行了优化。以大肠杆菌-明串珠菌穿梭质粒pCW4为载体,以明串珠菌为受体,文章优化了细胞壁处理方式、电击参数、复苏时间等与电转化相关的因素。结果表明:用氨苄浓度0.7μg/mL的MRS培养基培养明串珠菌至OD600为0.5左右,以PBS作缓冲液,收获制成感受态细胞,与1μgDNA混合,在电场强度12kV/cm、电阻200Ω、电容25μF下电击转化,以含80mmol/LMgCl2的MRS培养基复苏培养3h,得到最高的转化效率为1.75×105
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