论文部分内容阅读
布鲁氏菌病是由布鲁氏菌引起的一种人畜共患病，该菌分为6个种19个生物型，在世界上呈广泛性分布，能够导致人和牛、羊等多种家畜发病。肉羊是马尔他布鲁氏菌、流产布鲁氏菌等多种类生物型宿主，主要表现为母羊流产、不孕、子宫炎和公羊睾丸炎、关节炎等临床病变。饲养人员通过接触感染后，常表现为全身乏力、长期发热、精神抑郁甚至头痛、关节强直等症状。因此，该病不仅造成养殖效益下降，而且潜在威胁人类健康，被世界卫生组织列为法定动物报告疫病，我国卫生部将其列为乙类传染病，我国农业部多年来一直高度共识布鲁氏菌病的预防和净化工作，凸显其重要的公共卫生意义。
近年来，随着国家《全国牛羊肉生产发展规划（2013-2020年）》的出台，各地也相继制定了肉牛肉羊发展规划，为肉羊产业发展提供了良好的机遇。而随着肉羊产业规模化发展和引种等活羊大范围的流动，该病在各地血清学检测一直有阳性病例。由于布鲁氏菌为胞内寄生菌，一旦侵入机体，特别是形成多发性病灶后，很难将其从体内根除，耐过病畜很容易成为隐性传播源。因此，该病的净化常采用全面检测和淘汰阳性家畜的办法。为此，我们在某肉羊场进行了检测净化技术应用，收到了良好效果，特此报告如下。
1 材料与方法
1.1 检测程序
按照检测淘汰的程序进行（表1）。初次检测进行全群采样检测；若存在阳性结果，淘汰阳性羊，并进行全场消毒；间隔1～2个月，进行2次全群采样检测，根据结果淘汰阳性羊；依此间隔1～2个月进行一次采样检测处理，直到没有任何阳性结果出现。之后每隔半年对种母羊按照10%～20%的比例和全部种公羊进行抽检，应没有阳性结果出现；若出现阳性结果，应淘汰阳性羊，并恢复对全群采样检测循环。
1.2 样品采集与处理
采用人工保定，使用5mL一次性注射器颈静脉采血，2～3mL/只，分别做好样品标记和采样记录。血样采集后，要将针管进行适当回抽，以形成斜面，利于血清析出。采集样品送入实验室后，将血清分装入PG管待检。必要时，采取离心方式分离血清。
1.3 检测试剂与方法
布鲁氏菌虎红平板凝集抗原（批号201405），阳性血清（批号20140228），布鲁氏菌试管凝集试验抗原（批号20131113），均购自中国兽医药品监察所。全部样品先采用虎红平板凝集试验进行初检，再对阳性样品和疑似阳性样品用试管凝集试验进行复验。检测方法结果判定按照国家标准GBIT18646-2002动物布鲁氏菌诊断技术进行。
1.4 淘汰和净化措施
对检测阳性羊要坚决进行淘汰处理，不能用于生产和育肥。淘汰方法为定点屠宰，肉品进行蒸煮后外卖或食用，毛皮、内脏等进行深埋作无害化处理。有阳性结果检出时，要彻底清理圈舍中积粪，集中进行密闭堆肥发酵，对场地用5%的生石灰进行铺撒；对水槽等用具选用绿都百毒杀（稀戊二醛溶液）或绿都金碘（聚维酮碘溶液）进行消毒后，用清水冲洗干净；对密闭的空间，选用烟水宝（二氯异氰脲酸钠粉45%）进行烟熏消毒。
2 结果
2.1 首次检测结果
全群共357只，其中种公羊6只，种母羊128只，其他为青年羊或羔羊。首次全群检测虎红平板凝集试验5只阳性，2只疑似阳性；对阳性结果和疑似阳性结果样品用试管凝集试验复验，5只阳性结果凝集效价均在1：50以上，全部为阳性；2只疑似阳性试管凝集试验效价在1：25以下，初步判断为阴性。羊群布鲁氏菌阳性率约为1.4%。
根据检测结果，按照既定的淘汰和净化措施对阳性羊和羊舍進行淘汰、兀害化处理和全面消毒。并制定了带羊消毒方案，1～2次/d对羊舍进行消毒。
2.2 二次检测结果
继首次全群检测1个月时间，对淘汰阳性羊后的352只羊进行了二次检测。结果显示，虎红平板凝集试验2只阳性，通过试管凝集试验复验仍为阳性。阳性率约为0.56%。
淘汰无害化处理和净化措施按照既定的方案实施。
2.3 三次检测结果
继二次全群检测2个月时间，对全群350只羊进行了虎红平板凝集试验检测，结果均为阴性。
2.4 四次检测结果
继三次全群检测6个月时间，对羊群全部种公羊和部分母羊共计66只进行了采样检测，虎红平板凝集试验结果显示均为阴性。
3 小结与讨论
1）布鲁氏菌病的血清学检测方法主要包括凝集反应、沉淀反应、补体结合反应、变态反应、ELISA试验等。平板凝集试验由于简便易行，对试验仪器耗材等条件要求较低等优势利于基层推广应用，并且能够满足大面积检疫筛选的需求。对阳性和疑似阳性结果采用试管凝集试验进行复检，能够提高检验的准确性，降低假阳性结果的误判。
2）通过检测结果可以看出该场存在羊布鲁氏菌的感染问题。通过调查发现，与该场从外面引种有直接关系。该场引种检测时，为布鲁氏菌病阴性羊，购进后直接混群饲养，没有隔离饲养和再次检测，致使潜伏感染的羊成为该病的传染源。凝集素抗体的产生需要一个过程，潜伏期可能检测不到抗体，致使无法准确判断是否感染。正确的做法应该是，引种前后至少检测两次，即首次检测布鲁氏菌阴性，在隔离饲养1～2个月再行采样检测，全部为阴性结果时才能混群饲养。
3）本试验通过连续4次检测，并淘汰无害化处理病羊，配合全场强制性消毒等措施，阳性感染由最初的1.4%降至0，没再有新的感染病例出现，收到了较好的效果。有效证明了当前对于布鲁氏菌病无定义流行病区及以上区域，检测淘汰仍然是控制该病有效的办法。
4）对于布鲁氏菌感染羊的兀害化处理，本试验采取了定点监督屠宰，肉品加工食用，毛皮、内脏等无害化处理的尝试。一是担心场主减少亏损的实际需求，将病羊外卖，增加疫病传播和扩散的问题发生。二是考虑布鲁氏菌对湿热的抵抗力不强，60℃30min或70℃5min，甚至煮沸可以瞬间将其杀死，其肉品在熟制后完全可以食用。由于无害化处理办法配套措施和要求还有待完善和规范，如补贴费用不足等；建议由政府部门新设或指定定点屠宰和加工，但同时要做好安全运输、屠宰过程控制和废弃物的无害化处理等全程控制工作。
5）在净化过程中，消毒工作同样重要。重点包括粪便清理、密闭发酵处理；场地消毒，如果为床上饲养，还要做好饲养床的全面高压清洗和消毒工作；羊舍饮用水槽等物品及饲养人员衣物的清洗消毒等，关键是不留死角，以免病原菌残存，引起疫病复发。
6）长期看来，布鲁氏菌新型疫苗的研发和应用应该成为该病防控的有力武器。特别是标记疫苗等新型疫苗和相关检测诊断试剂盒的研发，将有效破解疫苗免疫反应和自然感染兀法区别、疫苗毒性大和容易存在残毒等问题，为该病检测净化及防控提供多样化的选择。要切实加强养殖人员和相关行业从业者的公共卫生教育，提高防控布鲁氏菌病的风险意识，降低人员感染的机率，为构建和谐社会，推动肉羊产业可持续健康发展做出积极的贡献。
近年来，随着国家《全国牛羊肉生产发展规划（2013-2020年）》的出台，各地也相继制定了肉牛肉羊发展规划，为肉羊产业发展提供了良好的机遇。而随着肉羊产业规模化发展和引种等活羊大范围的流动，该病在各地血清学检测一直有阳性病例。由于布鲁氏菌为胞内寄生菌，一旦侵入机体，特别是形成多发性病灶后，很难将其从体内根除，耐过病畜很容易成为隐性传播源。因此，该病的净化常采用全面检测和淘汰阳性家畜的办法。为此，我们在某肉羊场进行了检测净化技术应用，收到了良好效果，特此报告如下。
1 材料与方法
1.1 检测程序
按照检测淘汰的程序进行（表1）。初次检测进行全群采样检测；若存在阳性结果，淘汰阳性羊，并进行全场消毒；间隔1～2个月，进行2次全群采样检测，根据结果淘汰阳性羊；依此间隔1～2个月进行一次采样检测处理，直到没有任何阳性结果出现。之后每隔半年对种母羊按照10%～20%的比例和全部种公羊进行抽检，应没有阳性结果出现；若出现阳性结果，应淘汰阳性羊，并恢复对全群采样检测循环。
1.2 样品采集与处理
采用人工保定，使用5mL一次性注射器颈静脉采血，2～3mL/只，分别做好样品标记和采样记录。血样采集后，要将针管进行适当回抽，以形成斜面，利于血清析出。采集样品送入实验室后，将血清分装入PG管待检。必要时，采取离心方式分离血清。
1.3 检测试剂与方法
布鲁氏菌虎红平板凝集抗原（批号201405），阳性血清（批号20140228），布鲁氏菌试管凝集试验抗原（批号20131113），均购自中国兽医药品监察所。全部样品先采用虎红平板凝集试验进行初检，再对阳性样品和疑似阳性样品用试管凝集试验进行复验。检测方法结果判定按照国家标准GBIT18646-2002动物布鲁氏菌诊断技术进行。
1.4 淘汰和净化措施
对检测阳性羊要坚决进行淘汰处理，不能用于生产和育肥。淘汰方法为定点屠宰，肉品进行蒸煮后外卖或食用，毛皮、内脏等进行深埋作无害化处理。有阳性结果检出时，要彻底清理圈舍中积粪，集中进行密闭堆肥发酵，对场地用5%的生石灰进行铺撒；对水槽等用具选用绿都百毒杀（稀戊二醛溶液）或绿都金碘（聚维酮碘溶液）进行消毒后，用清水冲洗干净；对密闭的空间，选用烟水宝（二氯异氰脲酸钠粉45%）进行烟熏消毒。
2 结果
2.1 首次检测结果
全群共357只，其中种公羊6只，种母羊128只，其他为青年羊或羔羊。首次全群检测虎红平板凝集试验5只阳性，2只疑似阳性；对阳性结果和疑似阳性结果样品用试管凝集试验复验，5只阳性结果凝集效价均在1：50以上，全部为阳性；2只疑似阳性试管凝集试验效价在1：25以下，初步判断为阴性。羊群布鲁氏菌阳性率约为1.4%。
根据检测结果，按照既定的淘汰和净化措施对阳性羊和羊舍進行淘汰、兀害化处理和全面消毒。并制定了带羊消毒方案，1～2次/d对羊舍进行消毒。
2.2 二次检测结果
继首次全群检测1个月时间，对淘汰阳性羊后的352只羊进行了二次检测。结果显示，虎红平板凝集试验2只阳性，通过试管凝集试验复验仍为阳性。阳性率约为0.56%。
淘汰无害化处理和净化措施按照既定的方案实施。
2.3 三次检测结果
继二次全群检测2个月时间，对全群350只羊进行了虎红平板凝集试验检测，结果均为阴性。
2.4 四次检测结果
继三次全群检测6个月时间，对羊群全部种公羊和部分母羊共计66只进行了采样检测，虎红平板凝集试验结果显示均为阴性。
3 小结与讨论
1）布鲁氏菌病的血清学检测方法主要包括凝集反应、沉淀反应、补体结合反应、变态反应、ELISA试验等。平板凝集试验由于简便易行，对试验仪器耗材等条件要求较低等优势利于基层推广应用，并且能够满足大面积检疫筛选的需求。对阳性和疑似阳性结果采用试管凝集试验进行复检，能够提高检验的准确性，降低假阳性结果的误判。
2）通过检测结果可以看出该场存在羊布鲁氏菌的感染问题。通过调查发现，与该场从外面引种有直接关系。该场引种检测时，为布鲁氏菌病阴性羊，购进后直接混群饲养，没有隔离饲养和再次检测，致使潜伏感染的羊成为该病的传染源。凝集素抗体的产生需要一个过程，潜伏期可能检测不到抗体，致使无法准确判断是否感染。正确的做法应该是，引种前后至少检测两次，即首次检测布鲁氏菌阴性，在隔离饲养1～2个月再行采样检测，全部为阴性结果时才能混群饲养。
3）本试验通过连续4次检测，并淘汰无害化处理病羊，配合全场强制性消毒等措施，阳性感染由最初的1.4%降至0，没再有新的感染病例出现，收到了较好的效果。有效证明了当前对于布鲁氏菌病无定义流行病区及以上区域，检测淘汰仍然是控制该病有效的办法。
4）对于布鲁氏菌感染羊的兀害化处理，本试验采取了定点监督屠宰，肉品加工食用，毛皮、内脏等无害化处理的尝试。一是担心场主减少亏损的实际需求，将病羊外卖，增加疫病传播和扩散的问题发生。二是考虑布鲁氏菌对湿热的抵抗力不强，60℃30min或70℃5min，甚至煮沸可以瞬间将其杀死，其肉品在熟制后完全可以食用。由于无害化处理办法配套措施和要求还有待完善和规范，如补贴费用不足等；建议由政府部门新设或指定定点屠宰和加工，但同时要做好安全运输、屠宰过程控制和废弃物的无害化处理等全程控制工作。
5）在净化过程中，消毒工作同样重要。重点包括粪便清理、密闭发酵处理；场地消毒，如果为床上饲养，还要做好饲养床的全面高压清洗和消毒工作；羊舍饮用水槽等物品及饲养人员衣物的清洗消毒等，关键是不留死角，以免病原菌残存，引起疫病复发。
6）长期看来，布鲁氏菌新型疫苗的研发和应用应该成为该病防控的有力武器。特别是标记疫苗等新型疫苗和相关检测诊断试剂盒的研发，将有效破解疫苗免疫反应和自然感染兀法区别、疫苗毒性大和容易存在残毒等问题，为该病检测净化及防控提供多样化的选择。要切实加强养殖人员和相关行业从业者的公共卫生教育，提高防控布鲁氏菌病的风险意识，降低人员感染的机率，为构建和谐社会，推动肉羊产业可持续健康发展做出积极的贡献。