人CTLA-4胞外区cDNA的克隆及Ig融合蛋白表达载体的构建

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目的 克隆人CTLA 4胞外区cDNA、构建人CTLA 4胞外区与人免疫球蛋白IgGFc融合蛋白表达载体 ,为研究CTLA 4 Ig融合蛋白及其临床应用奠定基础。方法 从抗人CD3单克隆抗体和PMA活化的健康中国人外周血淋巴细胞总RNA中 ,扩增人CTLA 4基因胞外区cDNA片段 ,经HindⅢ +BclⅠ双酶切后定向插入Ig融合蛋白表达载体。结果 从活化人T细胞中扩增出人CTLA 4胞外区cDNA片段 ,并将其正确插入Ig融合蛋白表达载体 ,成功构建了CTLA 4 Ig融合蛋白表达载体 ,表达载体的构建与预期设计相符 ;CTLA 4基因胞外区cDNA序列与文献报道一致。结论 本研究成功地克隆了人CTLA 4胞外区cDNA片段 ,构建了CTLA 4 Ig融合蛋白表达载体 ,为进一步在哺乳动物细胞中表达CTLA 4 Ig融合蛋白、探讨其在实验室及临床的应用奠定了基础。
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