论文部分内容阅读
背景
内质网应激在糖尿病视网膜病变(DR)中发挥着重要作用。羟甲基戊二酰辅酶A还原酶降解蛋白1(Hrd1,又名Syvn1)作为一种内质网相关蛋白降解(ERAD)途径中的核心蛋白,能够减少内质网应激。
目的构建Hrd1高表达小鼠,为今后研究Hrd1在DR中的作用提供动物模型。
方法构建Hrd1系统表达重组质粒,酶切、测序后显微注射3 pl到685枚C57BL/6小鼠受精卵中,移植到代孕母鼠,得到Hrd1转基因小鼠。利用鼠尾PCR检测法鉴定F0代小鼠的基因型。得到Hrd1基因检测阳性鼠后,使其分别与野生型鼠杂交,得到F1代Hrd1转基因小鼠,取鼠尾组织,用PCR检测法再次鉴定F1代小鼠基因型。
结果成功构建了Hrd1重组载体,重组质粒pRP.ExBi-EF1а-Syvn1-IRES-eGFP的全序列测定结果显示,cDNA序列均正确。接受了Hrd1-pcDNA显微注射的685枚受精卵中成活598枚。将存活的受精卵移植到代孕母鼠后共产子鼠41只,获F0代子鼠8只,生理活动均良好。PCR电泳显示339 bp处阳性条带,该基因型可以传递到子代F1。
结论成功构建了Hrd1转基因小鼠。