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目的探讨三阴性乳腺癌（TNBC）细胞和肿瘤相关成纤维细胞（CAFs）共培养环境下,CAFs自噬促进TNBC细胞转移的作用机制。方法 （1）分离和鉴定CAFs:采用前瞻性研究方法收集2015年1月至2016年12月期间,就诊于南方医科大学珠江医院的6例TNBC患者（临床分期Ⅱ～Ⅲ期）的肿瘤组织和癌旁正常组织,从这些标本中分离CAFs和正常成纤维细胞（NFs）。进一步采用荧光抗体标记抗α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,并计算α-SMA阳性细胞比例,采用Western blot检测CAFs和NFs的α-SMA表达水平,以鉴定CAFs为本实验所需。（2）评估CAFs自噬水平:利用Western blot检测CAFs组、NFs组和CAFs+3-MA组（加入自噬抑制剂3-MA的CAFs）自噬标志蛋白beclin 1和p62的表达水平。（3）明确CAFs自噬对MDA-MB-231和BT-549细胞迁移的作用:采用Transwell小室模型观察不同培养条件[分4组,包括空白组（含10%FBS的DMEM培养基,即普通培养基）、NFs组、CAFs组和CAFs+3-MA组]下MDA-MB-231和BT-549的细胞迁移数。（4）明确CAFs自噬对MDA-MB-231和BT-549细胞发生上皮-间质转化（EMT）的影响:采用Western blot检测3种培养条件[普通培养基（空白组）、CAFs条件培养基（CAFs-CM组）和加入3-MA的CAFs条件培养基（CAFs+3-MA-CM组）]下MDA-MB-231和BT-549 EMT相关蛋白（E-cadherin,N-cadherin, vimentin）的表达情况。正态分布的数据用■表示,偏态分布的数据用M(P25-P75)表示。2组间α-SMA表达水平比较采用两独立样本非参数秩和检验,α-SMA阳性细胞比例比较采用两独立样本t检验,各组间细胞自噬标志蛋白表达水平、细胞迁移数和EMT相关蛋白表达水平的比较均采用单因素方差分析。结果 （1）荧光显微镜下观察发现,每视野下CAFs组α-SMA阳性细胞比例显著高于NFs组[（81.11±3.95）%比（5.11±2.37）%,t=49.49,P<0.001); Western blot检测表明,CAFs组α-SMA表达水平也高于NFs组[M(P25～P75):0.98（0.95～0.98）比0.48（0.47～0.48）,Z=2.023,P=0.043]。（2）CAFs组、NFs组和CAFs+3-MA组细胞beclin 1表达水平分别为0.99±0.03、0.73±0.04和0.26±0.02,p62表达水平分别为0.75±0.02、0.98±0.03和0.97±0.01,组间比较,差异均有统计学意义（F=546.188、136.353,P均<0.001）,其中,CAFs组的beclin 1表达水平显著高于CAFs+3-MA组（P<0.001）,p62表达水平明显低于CAFs+3-MA组（P<0.001）。（3）CAFs组、NFs组、CAFs+3-MA组以及空白组MDA-MB-231细胞迁移数分别为（41.67±2.78）、（23.33±2.18）、（22.00±1.76）、（18.00±2.12）个,4组比较,差异有统计学意义（F=198.374,P<0.001）;同样,4组BT-549细胞的迁移数分别为（35.22±1.97）、（22.00±2.60）、（25.11±2.15）、（15.22±2.00）个,组间比较,差异也有统计学意义（F=129.424,P<0.001）,并且,CAFs组的MDA-MB-231和BT-549细胞迁移数均明显高于其余3组（P<0.050）。（4）MDA-MB-231细胞分别与普通培养基（空白组）、CAFs条件培养基（CAFs-CM组）和加入3-MA的CAFs条件培养基（CAFs+3-MA-CM组）共培养后,3组细胞的E-cadherin表达水平分别为0.79±0.03、0.54±0.02和0.87±0.04, N-cadherin表达水平分别为0.59±0.02、1.00±0.02和0.93±0.02, vimentin表达水平分别为0.62±0.03、1.01±0.01和0.89±0.09,组间比较,差异也均有统计学意义（F=139.286、604.905、43.884,P均<0.001）。同样,BT-549细胞分别与以上3种培养基共培养后,3组细胞的E-cadherin表达水平分别为1.01±0.03、0.63±0.03和0.98±0.03, N-cadherin表达水平分别为0.58±0.01、0.94±0.04和0.95±0.03, vimentin表达水平分别为0.61±0.01、0.98±0.03和0.75±0.02,组间比较,差异也均有统计学意义（F=210.102、184.477、217.659,P均<0.001）。结论 CAFs可促进TNBC细胞MDA-MB-231和BT-549的迁移和EMT过程,且该作用与CAFs自噬相关。