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目的
对牡蛎中诺如病毒检测的三种前处理方法进行比较并探讨应用策略。
方法2014年8月-2015年3月采集160只市售牡蛎,每组5只,共32组样品,取其肠腺组织采用直接处理法(M1)、PEG 8000沉淀法(M2)和蛋白酶K消化-PEG 8000沉淀法(M3)三种方法进行前处理,提取核酸后荧光定量RT-PCR检测诺如病毒核酸。应用串并联法对三种前处理方法的样品阳性率进行分析,利用χ2检验比较不同方法的阳性率差异,应用一致性检验比较不同方法的一致性,对荧光RT-PCR所得到的Ct值进行ANOVA检验。
结果M1、M2、M3三种前处理方法诺如病毒阳性率依次为15.63%(5/32)、34.38%(11/32)和37.50%(12/32);M1/M2/M3并联使用的阳性率最高,为50.00%(16/32);其次为M2/M3并联法,阳性率为46.88%(15/32);M1+M3串联或M1+M2+M3串联的阳性率最低,均为9.38%(3/32)。M2/M3与M1/M2/M3的阳性率经χ2检验比较,差异无统计学意义(P>0.05),两种方法经一致性检验,kappa=0.931(P<0.05),一致性较高。M1、M2、M3三种方法检测阳性样品的Ct值依次为33.44±0.66、33.70±1.88和33.42±2.44。经ANOVA检验,差异无统计学意义(P>0.05)。
结论常规监测时推荐使用M2或M3,暴发疫情溯源时可考虑使用M2/M3并联法。