微波辅助超薄切片快速染色技术的优化与应用

来源 :中华实验和临床病毒学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:blameoper
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的

优化基于微波辅助的快速超薄切片染色的关键参数,建立一种快速超薄切片染色方法。

方法

使用微波组织处理仪以不同功率及染色时间分别用乙酸双氧铀(uranium acetate,UA)和枸橼酸铅(lead citrate,LC)对细胞超薄切片进行染色,通过透射电子显微镜观察并拍照细胞超微结构,评价两种染色剂的最佳染色条件,组合UA和LC最佳微波染色条件,获得最佳UA和LC双染色参数。用腺病毒、肠道病毒71型、疱疹病毒和流感病毒感染的细胞样本验证超薄切片快速染色效果。

结果

微波组织处理仪优选微波辅助超薄切片染色条件分别为功率200 W、UA染色30 s、LC染色20 s;或者功率300 W、UA染色30 s、LC染色30 s。LC浓度1∶6稀释仍可获得满意的染色效果。参数可推广至家用微波炉应用,最佳染色条件为功率320 W,UA染色30 s、LC染色30 s。

结论

获得了微波辅助的超薄切片染色最佳参数,可应用于细胞、病毒超薄切片的快速染色。

其他文献
目的分析芜湖市2014年首例人感染A(H7N9)禽流感病毒基因组特征。方法患者标本经Real-time RT-PCR检测A(H7N9)核酸阳性后送检中国国家流感中心分离毒株并进行全基因组测序,序列提交GenBank并Blast。运用生物信息学软件DNAStar Lasergene 7.1和MEGA7.0对该病毒基因组进行同源性、关键氨基酸位点突变及系统进化树分析。结果毒株命名为A/Wuhu/1/2
期刊
目的探讨发热伴血小板减少综合征(severe fever with thrombocytopenia syndrome,SFTS)患者血清细胞因子与趋化因子水平与病情严重程度的关联。方法收集济南市2014—2017年47例SFTS患者血清,其中11例死亡患者血清为死亡组,36例幸存患者血清为幸存组,同时选取10例健康组血清作为对照组。利用Luminex液相芯片检测分析外周血清40种细胞因子与趋化因
目的对南京地区2014—2016年流行的甲型H3N2型流感病毒血凝素(hemagglutintin,HA)基因进行测序和分析,掌握HA基因的位点突变和遗传进化特征。方法于2014—2016年流感监测样本H3N2型流感病毒阳性标本中,根据时间段随机选取27株,MDCK细胞进行病毒分离和纯化,吸取病毒培养液提取病毒RNA,反转录-聚合酶链反应(reverse transcritase polymera
目的分析宁夏艾滋病患者(AIDS)免费抗病毒治疗现状及影响因素。方法利用全国艾滋病防治信息系统的工作数据,采用描述性及趋势检验分析宁夏HIV/AIDS抗病毒治疗历年变化趋势和主要特征,logistic回归分析影响该人群入组治疗因素。结果2004—2017年宁夏入组治疗人数共计1 365例,男女比平均为4.1∶1,以青壮年为主,>60岁人群治疗维持在9%的比例,≤20岁人群治疗比例由无增长至5%,婚
目的构建并拯救增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein, EGFP)标记的EGFP-EV-A71重组病毒。方法利用重叠PCR技术,以pMD19T-SDLY107全长质粒为模板,将2A蛋白酶识别序列加入到结构蛋白VP4的5′端;以pEGFP-N1质粒作为模板,扩增获得EGFP目的片段,将其插入到上述重组质粒中,得到重组质粒pMD19T-107-EGFP
目的探讨贫血在HBV感染肝硬化失代偿期(HBV-DC)患者中的发生率及其对HBV-DC患者1年预后影响的研究。方法前瞻性入组2016年1月至2018年12月在中国科学院大学宁波华美医院住院的HBV-DC患者647例,调查患者贫血情况及程度,基线评估指标等,COX生存分析贫血及其严重程度在预测HBV-DC患者1年预后的预测价值。结果647例HBV-DC患者,合并贫血406例,占总人群的62.8%,其
目的探讨慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B, CHB)患者不同免疫分期中白细胞介素-23(interleukin-23,IL-23)的表达及其对相关细胞因子、基因的影响,探讨IL-23在CHB免疫进展、免疫调节中的作用。方法采用回顾性研究方法,纳入CHB患者197人(包括免疫耐受期患者16人、免疫清除期患者106人、免疫控制期患者59人、再活动期患者16人)及健康对照者26人。采
目的分析北京市一株人呼吸道合胞病毒(human respiratory syncytial virus, HRSV)A亚型全基因组序列的变异和遗传特征。方法对北京友谊医院住院儿童鼻咽抽吸物样本核酸进行二代测序,获得了一株HRSV A亚型全基因组序列,与其他相关参考株构建系统发生树,并对主要蛋白编码区进行同源性分析、单核苷酸多态性分析以及N-糖基化位点预测。结果系统发生树和同源性分析结果提示,本研究
人乳头瘤病毒(human papillomavirus, HPV)感染是常见的生殖系统病毒感染,持续性HPV感染可以导致宫颈癌、外阴癌、肛门癌、阴茎癌及生殖器疣等疾病。目前已上市的预防性HPV疫苗包括葛兰素史克(GlaxoSmithKline)公司的2价疫苗、默沙东(Merck & Co., Inc)公司的4价和9价疫苗万泰沧海生物技术有限公司的2价疫苗,由不同类型的HPV衣壳蛋白L1组装而成,诱