【摘 要】
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利用酶促重组等温扩增（enzymatic recombinase amplification，ERA）技术建立快速检测肺炎支原体的实时荧光检测方法。针对肺炎支原体P1基因设计特异性引物和探针，优化反应条件，分析其敏感性和特异性，并对临床样本进行验证。ERA实时荧光法在25-40℃均具有扩增能力，在35℃条件下对肺炎支原体的扩增效果最好，20 min内可完成扩增；该法对肺炎支原体的检出限为10~3
【基金项目】
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湖南省研究生科研创新项目（QL20210232）； 湖南省大学生创新创业训练项目（S202010555230,S202110555123）； 湖南省教育厅科学研究项目（21A0261）； 湖南省卫生健康委科研重点课题（20201915）； 湖南省临床医疗技术创新引
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利用酶促重组等温扩增（enzymatic recombinase amplification，ERA）技术建立快速检测肺炎支原体的实时荧光检测方法。针对肺炎支原体P1基因设计特异性引物和探针，优化反应条件，分析其敏感性和特异性，并对临床样本进行验证。ERA实时荧光法在25-40℃均具有扩增能力，在35℃条件下对肺炎支原体的扩增效果最好，20 min内可完成扩增；该法对肺炎支原体的检出限为10~3 copies/μL；并对其他6种呼吸道病原体进行检测，均无扩增曲线产生，有较好的特异性；以荧光定量PCR法检测结果为标准，ERA实时荧光法对34份临床样本的检测结果的诊断敏感度为96.15%、特异度为100%、阳性预测值为100%、阴性预测值为88.89%。本研究构建的ERA实时荧光法可以快速简单、灵敏和特异地检测出肺炎支原体，满足现场检测的需求。
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