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摘 要：本文对注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠中头孢曲松钠的含量测定方法进行研究。固定相为：安捷伦Cl8（4.6mm×250mm，5um），乙腈-甲醇-0.2mol/L正辛胺溶液-磷酸（15：15：70：0.1）为流动相，检测波长为254nm，流速1.0mL·min-1，柱温：30℃。头孢曲松钠在0.1～1.5mg·mL-1范围内呈良好的线性关系。头孢曲松钠的平均回收率为99.5%，RSD为0.65%（n=6）；此方法简便、准确、重现性好，可用于注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠中头孢曲松钠的含量测定。
关键词：注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠；头孢曲松钠；含量
注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠由头孢曲松钠和他唑巴坦钠组成[1-2]。注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠用于治疗对头孢曲松单药耐药、对本复方敏感的产β-内酰胺酶细菌引起的中、重度感染，包括下呼吸道感染、皮肤和皮肤软组织感染、细菌性败血症、尿路感染、单纯性淋病、急性细菌性中耳炎、盆腔炎、脑膜炎等的治疗以及外科手术预防感染[3-5]。本文采用高校液相测定了注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠中头孢曲松钠的含量。
1 仪器与试药
Kertone Lab MINI-D实验室纯水机（科尔顿（中国）有限公司）；P1201高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）；UV-2450紫外-可见分光光度计（岛津企业管理（中国）有限公司）；SCQ-7201E双频加热型超声波清洗机（上海声彦超声波仪器有限公司）；ADAM实验室天平（海安谱科学仪器有限公司）；AP-01P型无油真空泵（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；R-1001-VN旋转蒸发仪（郑州长城科工贸有限公司）；梅特勒FE20K酸度计PH计（上海楚柏实验室设备有限公司）。头孢曲松钠对照品由中国药品生物制品检定所提供。醋酸（南京维之诚化学试剂有限公司）、磷酸二氢钾（福州申辉化工仪器设备有限公司）、正辛胺（福州申辉化工仪器设备有限公司）、乙腈（南京维之诚化学试剂有限公司）、甲醇（福州申辉化工仪器设备有限公司）、磷酸（南京维之诚化学试剂有限公司）、三乙胺（南京维之诚化学试剂有限公司）、磷酸二氢铵（福州申辉化工仪器设备有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-甲醇-0.2mol/L正辛胺溶液-磷酸（15：15：70：0.1）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按头孢曲松钠峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠，精密称取，精密加入流动相30mL，超声提取10分钟，放冷，过滤，滤液转移至100毫升容量瓶内用流动相定容，摇匀，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取头孢曲松钠对照品约10mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含0.2mg的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取他唑巴坦钠，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在头孢曲松钠出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3、1.5mg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，头孢曲松钠对照品在0.1～1.5mg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取头孢曲松钠对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.73%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.77%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4，6小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品头孢曲松钠峰面积积分值的RSD为0.61%。结果表明头孢曲松钠至少在6小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的头孢曲松钠对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%，RSD为0.65%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠三批样品中头孢曲松钠的含量，含量标示量的99.9%、100.1%、99.5%。
3 讨论
分别考察乙腈-甲醇-0.2mol/L正辛胺溶液-磷酸（15：15：70：0.1），12%醋酸溶液-0.2mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈-水（0.5：50：50：900），乙腈-甲醇-0.2mol/L正辛胺溶液-磷酸（30：15：55：0.1），乙腈-甲醇-水（10：1：89）（用磷酸调PH值为5.0），乙腈-甲醇-水（10：10：80）（用醋酸调PH值为5.0），12%醋酸溶液-0.2mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈-水（0.5：50：400：550），水-乙腈-三乙胺（80∶20：0.01）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-0.2mol/L正辛胺溶液-磷酸（15：15：70：0.1）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-0.2mol/L正辛胺溶液-磷酸（15：15：70：0.1）為流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠中头孢曲松钠的含量测定。注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠中头孢曲松钠的含量应为标示量的95-105%。
参考文献
[1]符健，邢增术，邢桂兰.注射用头孢噻肟钠舒巴坦钠的体内抗菌作用研究[J].海南大学学报（自然科学版），2004（2）.
[2]邢桂兰，谢学立，曾渝，符健.注射用头孢呋辛钠他唑巴坦钠制剂安全性研究[J].海南大学学报（自然科学版），2011（2）.
[3]张静，刘云，邹颖，陈伟民，刘广余.头孢曲松钠-他唑巴坦钠在中国健康志愿者体内的药动学[J].中国临床药学杂志，2005（2）.
[4]邢桂兰，王世雄，符健.注射用头孢他啶他唑巴坦钠的急性毒性研究[J].海南大学学报（自然科学版），2004（4）.
[5]吕晓菊，王浴生，刘小康，雷军，俞汝佳，宗志勇，高燕渝，冯萍，黄晴，袁华.注射用头孢噻肟/他唑巴坦钠体外药效学研究[J].四川生理科学杂志，2003（4）.
关键词：注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠；头孢曲松钠；含量
注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠由头孢曲松钠和他唑巴坦钠组成[1-2]。注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠用于治疗对头孢曲松单药耐药、对本复方敏感的产β-内酰胺酶细菌引起的中、重度感染，包括下呼吸道感染、皮肤和皮肤软组织感染、细菌性败血症、尿路感染、单纯性淋病、急性细菌性中耳炎、盆腔炎、脑膜炎等的治疗以及外科手术预防感染[3-5]。本文采用高校液相测定了注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠中头孢曲松钠的含量。
1 仪器与试药
Kertone Lab MINI-D实验室纯水机（科尔顿（中国）有限公司）；P1201高效液相色谱仪（大连依利特分析仪器有限公司）；UV-2450紫外-可见分光光度计（岛津企业管理（中国）有限公司）；SCQ-7201E双频加热型超声波清洗机（上海声彦超声波仪器有限公司）；ADAM实验室天平（海安谱科学仪器有限公司）；AP-01P型无油真空泵（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；R-1001-VN旋转蒸发仪（郑州长城科工贸有限公司）；梅特勒FE20K酸度计PH计（上海楚柏实验室设备有限公司）。头孢曲松钠对照品由中国药品生物制品检定所提供。醋酸（南京维之诚化学试剂有限公司）、磷酸二氢钾（福州申辉化工仪器设备有限公司）、正辛胺（福州申辉化工仪器设备有限公司）、乙腈（南京维之诚化学试剂有限公司）、甲醇（福州申辉化工仪器设备有限公司）、磷酸（南京维之诚化学试剂有限公司）、三乙胺（南京维之诚化学试剂有限公司）、磷酸二氢铵（福州申辉化工仪器设备有限公司）。
2 含量测定
2.1 色谱条件：依据查阅文献及考查的结果，确定色谱条件如下。色谱柱为安捷伦Cl8规格为（4.6mm×250mm，5um）；乙腈-甲醇-0.2mol/L正辛胺溶液-磷酸（15：15：70：0.1）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按头孢曲松钠峰计算应不得低于2000。
2.2 供试品溶液的制备
取注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠，精密称取，精密加入流动相30mL，超声提取10分钟，放冷，过滤，滤液转移至100毫升容量瓶内用流动相定容，摇匀，即得。
2.3 对照品溶液的制备
精密称取头孢曲松钠对照品约10mg，用流动相溶解并稀释成每1ml中含0.2mg的溶液，作为对照溶液。
2.4 阴性溶液的制备
依照处方取他唑巴坦钠，按样品制备工艺制成阴性对照样品，照供试品溶液的制备方法制成阴性液，依上述方法测定，结果在头孢曲松钠出峰处阴性液无色谱峰，结果阴性试验没有干扰，表明本方法专属性良好。
2.5 准曲线的制备
制备浓度为0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3、1.5mg·mL-1的对照品溶液，分别精密吸取10μL注入HPLC，记录色谱图。以峰面积积分值A（μg）为横坐标，进样量为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。试验表明，头孢曲松钠对照品在0.1～1.5mg·mL-1范围内线性关系良好。
2.6 精密度试验
依照2.4项下制备对照品溶液，精密吸取头孢曲松钠对照品溶液10μL重复进样6次，测定峰面积积分值，对照品峰面积积分值的RSD为0.73%。结果表明，本实验精密度良好。
2.7 重现性试验
分别称取同批注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠样品6份，按测定方法项下的方法制备供试品溶液，测定含量，并计算样品的RSD值，结果RSD为0.77%，结果表明，此含量测定方法的重现性良好。
2.8 稳定性试验
依照2.3项下供试品制备方法制备供试品溶液，分别在0，2，4，6小时精密吸取供试品溶液注入液相色谱仪，进样测定，供试品头孢曲松钠峰面积积分值的RSD为0.61%。结果表明头孢曲松钠至少在6小时内稳定。
2.9 回收率试验
采用加样回收试验，取已知含量的同一批供试品各6份，精密称定，分精密添加一定量的头孢曲松钠对照品，按供试品制备所述方法制备供试品溶液，测定含量（同时测定样品含量），计算回收率。6次测定的平均回收率为99.5%，RSD为0.65%。
2.10 样品含量测定
依照上述含量测定方法，测定注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠三批样品中头孢曲松钠的含量，含量标示量的99.9%、100.1%、99.5%。
3 讨论
分别考察乙腈-甲醇-0.2mol/L正辛胺溶液-磷酸（15：15：70：0.1），12%醋酸溶液-0.2mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈-水（0.5：50：50：900），乙腈-甲醇-0.2mol/L正辛胺溶液-磷酸（30：15：55：0.1），乙腈-甲醇-水（10：1：89）（用磷酸调PH值为5.0），乙腈-甲醇-水（10：10：80）（用醋酸调PH值为5.0），12%醋酸溶液-0.2mol/L磷酸二氢钾溶液-乙腈-水（0.5：50：400：550），水-乙腈-三乙胺（80∶20：0.01）不同比例的流动相，结果以乙腈-甲醇-0.2mol/L正辛胺溶液-磷酸（15：15：70：0.1）为流动相，供试品各峰分离效果最好，故选用乙腈-甲醇-0.2mol/L正辛胺溶液-磷酸（15：15：70：0.1）為流动相。此方法简便、准确、重现性好，可用于注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠中头孢曲松钠的含量测定。注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠中头孢曲松钠的含量应为标示量的95-105%。
参考文献
[1]符健，邢增术，邢桂兰.注射用头孢噻肟钠舒巴坦钠的体内抗菌作用研究[J].海南大学学报（自然科学版），2004（2）.
[2]邢桂兰，谢学立，曾渝，符健.注射用头孢呋辛钠他唑巴坦钠制剂安全性研究[J].海南大学学报（自然科学版），2011（2）.
[3]张静，刘云，邹颖，陈伟民，刘广余.头孢曲松钠-他唑巴坦钠在中国健康志愿者体内的药动学[J].中国临床药学杂志，2005（2）.
[4]邢桂兰，王世雄，符健.注射用头孢他啶他唑巴坦钠的急性毒性研究[J].海南大学学报（自然科学版），2004（4）.
[5]吕晓菊，王浴生，刘小康，雷军，俞汝佳，宗志勇，高燕渝，冯萍，黄晴，袁华.注射用头孢噻肟/他唑巴坦钠体外药效学研究[J].四川生理科学杂志，2003（4）.