论文部分内容阅读
目的 在体外细胞摄取实验及在体显像基础上,评价新型核素报告基因系统人ER配体结合域( hERL)/核素标记雌二醇(E2)应用的可行性,为其用于基因治疗的监测提供依据.方法 以内部核糖体进入位点序列(IRES)方式构建携带hERL和治疗VEGF165的重组质粒pDC316-hERL-IRES-VEGF165(简写为EIV),将其用腺病毒包装构建重组腺病毒复合体(Ad-EIV).采用悬浮贴壁法从SD大鼠股骨和胫骨原代提取骨髓MSCs并培养.将Ad-EIV和脂质体2000包裹重组质粒(LipoEIV)分别转染MSCs,利用RT-PCR和Western blot,对hERL和VEGF165 mRNA和蛋白质水平的表达分别进行检测.测定Ad-EIV组、Lipo-EIV组和未转染组MSCs对125I-E2在不同时间(1、3、6、9、12和24h)的摄取率.将转染Ad-EIV的MSCs注射至大鼠左前肢、未转染MSCs注射至右前肢后1d,注射16α-18 F-17β-E2(18F-FES)进行micro PET/CT活体显像.2组间均数比较采用t检验,相关性研究采用Pearson相关分析.结果 Ad-EIV转染MSCs后RT-PCR检测示hERL和VEGF165 mRNA的表达随着感染滴度的增加而增加,且呈正相关(r2分别为0.953和0.966,P均＜0.05);感染复数(MOI)=25、50、75和100时,其mRNA表达高于Lipo-EIV组.Western blot检测蛋白质水平的表达也得到同样的结果.Ad-EIV组和Lipo-E1V组MSCs对125I-E2的摄取率均随时间延长逐渐增高,24h最高,分别达到( 10.94 ±0.30)％和(8.93±0.18)％;各个时间点2种载体转染组均明显高于未转染对照组(3.54％～5.52％;t值分别为15.489～26.560、10.523～24.204,P均＜0.05),而Ad-EIV组摄取率高于Lipo-EIV组(t=4.132～16.168,P均＜0.05).Micro PET/CT大鼠活体显像显示注射Ad-EIV转染的MSCs之左前肢放射性浓聚明显高于对侧.结论 报告基因hERL可以通过腺病毒转染、脂质体包裹等多种形式转染细胞并成功表达,应用核素标记E2可以对其进行探测和显像.应用腺病毒转染报告基因的方式转染率更高.