研究Twist1基因在食管鳞癌中的表达、临床病理意义及对食管鳞癌迁移和侵袭的影响。
方法选取30例行手术切除的食管鳞癌患者的食管鳞癌组织和癌旁正常组织标本,实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot方法检测Twist1 mRNA和蛋白表达水平。以癌旁正常组织Twist1 mRNA表达水平为对照,检测三株食管鳞癌细胞株K70、K140、EC109的Twist1 mRNA相对表达水平,分析其与患者临床病理特征间的关系。选取食管鳞癌细胞株EC109分别采用细胞划痕实验和Transwell小室侵袭实验,分别转染Twist1小干扰RNA及对照双链无义RNA,比较两者之间的变化情况。
结果食管鳞癌组织中Twist1 mRNA表达水平明显高于癌旁正常组织(1.91 ± 0.93比0.54 ± 0.26),差异有统计学意义(P<0.01);三种食管鳞癌细胞株K70、K140、EC109中Twist1 mRNA相对表达水平明显高于癌旁正常组织(2.30 ± 0.34、1.78 ± 0.28和4.37 ± 0.25比1.00 ± 0.48),差异有统计学意义(P<0.05)。食管鳞癌组织中Twist1蛋白表达水平明显高于癌旁正常组织(1.35 ± 0.66比0.25 ± 0.05),差异有统计学意义(P<0.05)。食管鳞癌组织Twist1 mRNA相对表达水平与淋巴结转移、浸润程度有相关性(P<0.05)。分别转染Twist1小干扰RNA及对照双链无义RNA后食管鳞癌细胞株EC109中Twist1 mRNA表达水平分别为0.45 ± 0.16和1.00 ± 0.20,Twist1蛋白表达水平分别为0.24 ± 0.09和0.58 ± 0.10,两者比较差异均有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验结果表明,运用RAN干扰技术下调Twist1表达后,食管鳞癌细胞株EC109的36和72 h迁移率明显低于对照双链无义RNA[(32.6 ± 4.7)%比(16.2 ± 6.0)%和(71.9 ± 4.7)%比(53.2 ± 6.6)%],差异有统计学意义(P<0.05);Transwell细胞侵袭实验结果显示,转染Twist1小干扰RNA的EC109穿入小室膜底部的细胞总数较转染对照双链无义RNA明显减少(92.5 ± 8.1比32.7 ± 7.5),差异有统计学意义(P<0.05)。
结论Twist1基因可能在食管鳞癌中普遍异常高表达,其与癌组织浸润、淋巴结转移存在一定相关性,对食管鳞癌细胞迁移和侵袭可能有一定影响。