建立rs738409(C>G)多态性实时荧光定量PCR分型方法,并探讨rs738409多态性与非酒精性脂肪肝(NAFLD)的相关性。
方法方法学建立及遗传易感性分析。采用等位基因特异性引物,以TaqMan探针作为检测信号,根据Ct值的差值ΔCt(ΔCt=C等位基因引物反应体系Ct值-G等位基因引物反应体系Ct值),建立扩增受阻突变体系-TaqMan(ARMS-TaqMan)实时荧光定量PCR等位基因分型方法,并采用所建方法对航天中心医院2014年1至12月健康体检人员618名(男性401名,女性217名)的rs738409进行分型检测。脂肪肝采用B型超声进行检测。rs738409多态性与NAFLD的相关性采用χ2检验和多变量Logistic回归分析。
结果618名研究对象中NAFLD患病率为30.1%(186例),其中男性147例,女性39例;432名非NAFLD者(男性254名,女性178名)。ARMS-TaqMan方法检测的CC型ΔCt=-13.1±1.4(243名),CG型ΔCt=0.01±0.41(282名),GG型ΔCt=13.0±1.5(93名)。NAFLD患者组的GG型等位基因(21.5%)显著高于非NAFLD组(12.3%)(χ2=8.677, P=0.003)。控制性别、年龄、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖和体重指数后,与CC型比较,CG型和GG型发生NAFLD风险的OR值(95% CI)分别为1.35(0.91~2.00)和2.21(1.32~3.71)(P=0.013)。肝酶丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平在3组间差异有统计学意义(F=8.980, P<0.001),GG型的天冬氨酸氨基转移酶(AST)的水平显著高于CC型(F=6.491, P<0.001)。
结论rs738409 ARMS-TaqMan分型方法具有准确、一步检测、高通量等特点。rs738409 G等位基因是NAFLD遗传易感性的危险因素,并与肝酶ALT、AST升高具有显著相关性。(中华检验医学杂志,2016, 39:45-49)