芥蓝二氢黄酮醇4-还原酶基因BoaDFR的克隆与功能鉴定

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以白花芥蓝'四季粗条'为材料克隆了BoaDFR基因,GenBank登录号为MT472647,CDS序列长为1158 bp,编码385个氨基酸,与甘蓝型油菜、甘蓝和白菜等具有高度同源性.BoaDFR表达水平在芥蓝不同发育时期、不同器官中存在显著差异,随植株发育总体呈现先下降后上升的趋势,在幼嫩种子中表达量最高.芥蓝原生质体的亚细胞定位结果显示BoaDFR定位在细胞核上.构建了农杆菌介导的芥蓝瞬时过表达体系,将BoaDFR转入白花芥蓝'四季粗条'和黄花芥蓝'福州黄花'中,发现BoaDFR在两种芥蓝中均高水平表达,转基因植株叶片颜色明显变紫,花青素苷显著积累,总含量最高达461.43μg·g-1 FW,而野生型和转空载体芥蓝叶片中几乎检测不到花青素苷.通过HPLC在转基因植株叶片中共检测到8种花青素苷,均为矢车菊花青素苷,其中矢车菊-3-阿魏酰-丙二酰-槐糖苷-5-葡萄糖苷占比最高.
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