【摘 要】
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目的 探讨抑制蛋白磷酸酶4(protein phosphatase 4,PP4)活性对肝细胞脂性凋亡的影响.方法 以400μmol/L的棕榈酸(palmitic acid,PA)处理HepG2细胞24 h建立肝细胞脂性凋亡模型;以西方饮食喂养C57BL/6J小鼠16w建立非酒精性脂肪肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)模型;构建磷酸酶活性缺失的显性负性突变体AD-PP4RL腺病毒载体;转染AD-PP4RL至HepG2细胞腺病毒以抑制肝细胞中PP4的活性;尾静脉注射A
【机 构】
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北京师范大学生命科学学院抗性基因资源与分子发育北京市重点实验室 北京市, 100875;北京医院国家老年医学中心, 国家卫生健康委北京老年医学研究所, 国家卫生健康委老年医学重点实验室, 中国医学科学
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目的 探讨抑制蛋白磷酸酶4(protein phosphatase 4,PP4)活性对肝细胞脂性凋亡的影响.方法 以400μmol/L的棕榈酸(palmitic acid,PA)处理HepG2细胞24 h建立肝细胞脂性凋亡模型;以西方饮食喂养C57BL/6J小鼠16w建立非酒精性脂肪肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)模型;构建磷酸酶活性缺失的显性负性突变体AD-PP4RL腺病毒载体;转染AD-PP4RL至HepG2细胞腺病毒以抑制肝细胞中PP4的活性;尾静脉注射AD-PP4RL以抑制肝脏中PP4的活性;转染RAC1慢病毒至HepG2细胞中抑制RAC1的表达;BoDIPY染色检测细胞及组织中脂质蓄积情况;TUNEL染色检测细胞凋亡水平;免疫沉淀结合丝苏氨基酸磷酸酶活性检测法测定PP4活力;GTP酶活性检测试剂盒检测RAC1活性;Western印迹检测脂质代谢及脂性凋亡相关蛋白的表达水平.结果 ① 在PA处理的HepG2细胞及西方饮食喂养诱导的NASH小鼠肝脏中PP4活性升高;② 过表达磷酸酶活性缺失突变的腺病毒载体AD-PP4RL能有效抑制PP4活性;③ 抑制PP4活性降低PA诱导的HepG2细胞及NASH小鼠肝脏中脂性凋亡水平,下调脂性凋亡相关基因PUMA、Bim及c-caspase3的水平;④RAC1介导了在PP4在肝细胞脂性凋亡中的作用.结论 抑制PP4活性可以通过抑制RAC1介导的JNK信号通路的激活,改善肝细胞脂性凋亡.
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