PCR扩增过程中污染的预防与对策

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  PCR技术是聚合酶链反应,该技术可将极微量的靶DNA特异的扩增上百万倍,从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力。PCR反应的最大特点是具有较大扩增能力与极高的灵敏性,操作复杂,所以在其操作过程中常有污染发生,即使极少量的污染也会造成假阳性,稍有差错就会出现假阴性。
  本文讨论PCR扩增过程中污染的预防与对策。操作者必须熟练掌握技术,严格按操作规程操作,防止假阳性、假阴性结果的产生。
  污染的原因调查
  标本间的污染;采集标本的容器被污染;提取过程中加样枪污染;试剂的污染;提取过程中气溶胶的污染等。
  防止污染的预防与对策
  实验人员要熟练掌握PCR操作技术,严格规范操作程序,操作过程中加样枪的使用,手套、枪头、离心管应一次性使用。严格按试剂生产厂家提供的程序进行操作。
  严把质量关,在操作当中总结,马上到期的试剂或刚过期试剂对PCR结果影响很大。
  设立阴性质控和阳性质控:阴性质控以监测试剂是否污染,阳性质控以监测PCR反应是否成功,产物大小是否合本理论要求。
  实验室设置及设备的规范化
  实验室划分为4区:试剂准备区、,标本准备区、PCR循环扩增区、检测区。扩增仪的设置要符合要求,取样器刻度准确,减少PCR循环次数,只要PCR产物过剩检测水。
  近年来PCR技术已普及到各基层医院,广泛地用于感染性病原体,如HBV HCV的临床检测,由于缺乏对核酸扩增检验技术完整的了解以及缺乏质量保证措施,导致部分实验室结果出现假阳性、假阴性的出现,所以操作者必须熟练掌握技术,严格按操作规程操作,防止假阳性,假阴性结果的产生。
  
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