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为建立动物源性食品中β-内酰胺类药物残留检测的微生物抑制方法,对敏感菌嗜热脂肪芽孢杆菌ATCC10149选择性和特异性、样品提取方法、平板制备条件、方法检出限等技术参数进行研究;对肉、鱼、虾和牛乳等动物源性食品作添加试验进行方法验证。室内验证结果的重复性标准差在3.094%～11.14%,再现性标准差在3.141%～13.30%;室间验证结果无显著性差异。建立的方法可用于动物源性食品中苄青霉素、氨苄青霉素、羟氨苄青霉素、邻氯青霉素、双氯青霉素、苯唑青霉素和头孢噻呋7种β-内酰胺类药物残留检测,且能满足各国限量要求。