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摘要：目的优选心舒滴丸中人参提取、精制工艺条件。方法以人参皂苷Rg1、Re含量为指标，采用正交试验设计，优选人参提取工艺条件：以比吸附率、洗脱量为指标优选大孔吸附树脂精制工艺条件。结果优选提取工艺条件：体积分数为70％的乙醇6倍量，提取3次，每次1h；精制纯化工艺条件：采用AB 8型大孔吸附树脂，以体积分数为70％的乙醇为洗脱溶剂，4倍树脂体积。结论优选工艺可较好的提取纯化人参皂苷有效成分。
关键词：冠心病 心舒滴丸 制造
0 引言
心舒滴丸由人参、丹参、冰片等药物组成，用于冠心病的治疗，人参为方中主药，人参皂苷为其主要活性成分之一，具有明显的扩张冠状动脉、增加心肌血流量、提高心肌耐缺氧能力、调节心律和血压等作用。本文采用高效液相色谱法，以人参皂苷Rg1、Re的含量为指标，优选人参最佳提取工艺及大孔吸附树脂精制工艺条件，为生产提供依据。
1 仪器与试药
DIONEX 3000高效液相色谱仪(在线脱气、自动进样、光电二极管阵列检测器、Chromeleon色谱工作站，美国戴安公司)；人参皂苷Rg1对照品(批号：110754-200320，供含量测定用)、人参皂苷Re对照品(批号：110703-200322，供含量测定用)均由中国药品生物制品检定所提供；AB 8型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂)、HP20型大孔吸附树脂(北京绿百叶科技发展有限公司)、D101型大孔吸附树脂(天津农药总厂)；甲醇、乙腈(色谱纯，美国TEDlA公司)；其它试剂为分析纯。人参为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根，购自广州康尔健药业公司。符合《中国药典》2005年版一部人参项下要求。
2 方法与结果
2.1色谱条件色谱柱：DIONEX C18色谱柱(250mm×4.6mm，5um)；流动相：乙腈0.05％磷酸(体积比19.8:80.2)；检测波长：203nm；流速：1.0mL·min-1；在此条件下，供试品中人参皂苷Rg1与人参皂苷Re及其它组分峰能达到基线分离。
2.2对照品溶液的制备精密称取人参皂苍Rg1对照品0.01070g，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度；精密称取人参皂苷Re对照品0.010 15g，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度：精密量取人参皂苷Rgl对照品溶液2.5mL、人参皂苷Re对照品溶液2mL，置5mL量瓶中，加甲醇至刻度。制成每1mL含人参皂苷Rg1 0.535mg、人参皂苷Re 0.406mg的溶液，作为对照品溶液。
2.3标准曲线的制备分别精密吸取不同浓度的对照品溶液注入高效液相色谱仪中，以峰面积积分值为纵坐标(Y)，以人参皂苷Rg1微克数为横坐标(X)，计算回归方程Y=262173X-692964，r=0.9997，表明人参皂苷Rg1在5.35～53.5ug范围内与蜂面积积分值呈良好线性关系。以峰面积积分值为纵坐标(Y)，以人参皂苷Re微克数为横坐标(X)，计算回归方程Y=214558X-731 757，r=0.9998，表明人参皂苷Re在4.06～40.6ug范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.4优选提取工艺
2.4.1提取溶剂的选择人参主要有效成分皂苷类溶于水及乙醇，因此，可用水或乙醇为溶剂提取。首先分别以体积分数为50％和70％的乙醇、水为提取溶剂进行提取，结果显示以乙醇为溶剂时，人参皂苷Rg1、Re提取率较高。进而采用正交实验优选人参醇提工艺条件。
2.4.2实验设计以人参皂苷Ra1、Re为指标。采用L9(34)正交实验设计对影响提取效率的因素进行考察。
2.4.3供试品溶液的制备依照处方分别称取人参20g，置圆底烧瓶中，按L9(34)实验列号各条件回流提取。滤过，合并提取液，定容至1000L，作为样品溶液。精密吸取样品溶液各100mL，水浴蒸干，残渣加水25mL使溶解，移置分液漏斗中，用水饱和正丁醇提取4次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次25mL，弃去氨试液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，并定容至10mL量瓶中，作为供试品溶液。
2.4.4实验结果精密吸取供试品溶液、对照品溶液，分别注入液相色谱仪中，测定峰面积，计算人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量。由实验结果可知，因素A、D对人参提取效率有显著性影响，在以人参皂苷Rg1、Re为指标考察的四个因素中，依次排列为D＞A＞B＞C。较优的工艺应为A283C2D3，即体积分数为70％乙醇6倍量提取3次，每次1h。
2.5精制工艺考察按处方称取人参1000g，按照优选提取工艺条件操作，收集提取液，减压回收乙醇至无醇味，作为样品溶液，备用。
2.5.1吸附条件考察分别量取处理好的AB 8型、D101型、HP20型等大孔吸附树脂各10mL。平行两份，装柱，各精密量取样品溶液200mL通过树脂柱，以水洗至流出液近无色，收集流出液，定容。再以体积分数为70％乙醇100mL洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，定容，流出液分别取样，按照“2.4.3”项下制备方法制备供试品溶液，注入液相色谱仪中，测定人参皂苷Rg1、Re的含量。计算大孔吸附树脂比吸附量、洗脱率，结果显示AB 8型大孔吸附树脂对人参皂苷Rg1、Re的比吸附量和洗脱率均高于其他树脂，分别为4mg／mL树脂和98.3％，故选择AB 8型大孔吸附树脂。
2.5.2洗脱条件考察①洗脱溶剂浓度考察。精密量取样品溶液90mL通过AB 8型大孔吸附树脂柱(10mL树脂装柱，内径1.5cm)，树脂柱水洗至近无色，然后依次用体积分数为30％、50％、70％、90％乙醇各20mL洗脱，分别收集洗脱液，制备供试品溶液，注入液相色谱仪中，测定人参皂苷Rg1 、Re的含量。结果显示，体积分数为70％乙醇的累计洗脱率已达92.59％，故确定洗脱溶剂浓度为70％。②洗脱溶剂用量考察。精密量取处理后样品溶液通过树脂柱，水洗至流出液近无色，量取体积分数为70％乙醇60mL洗脱，分段收集洗脱液，制备供试品溶液，测定人参皂苷Rg1、Re的含量，结果显示4倍量树脂体积的洗脱溶剂洗脱率即可达到95.72％，故确定洗脱溶剂用量为4倍树脂体积。
3 讨论
3.1大孔吸附树脂具有物理化学稳定性高、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长、节省费用等诸多优点，在对总皂苷的粗分离和除去水溶性色素、多糖和无机盐等杂质显示出其独特的效果。本文通过考察影响树脂吸附的因素，发现药液浓度对树脂的吸附有显著影响，如药液浓度过低则精制时间增加，效率降低；药液浓度过高则影响树脂的吸附，造成吸附量降低。
3.2大孔吸附树脂可显著降低总固体得率，使活性成分高度富集，精制前提取液总固体得率为20％，人参皂苷Rg1、Re含量为5.10mg／g：大孔树脂精制后，其总固体得率为1.5％，人参皂苷Rg1、Re含量为56.88mg／g。同时吸湿性降低，有利于制成现代剂型的中药，便于质量控制。
关键词：冠心病 心舒滴丸 制造
0 引言
心舒滴丸由人参、丹参、冰片等药物组成，用于冠心病的治疗，人参为方中主药，人参皂苷为其主要活性成分之一，具有明显的扩张冠状动脉、增加心肌血流量、提高心肌耐缺氧能力、调节心律和血压等作用。本文采用高效液相色谱法，以人参皂苷Rg1、Re的含量为指标，优选人参最佳提取工艺及大孔吸附树脂精制工艺条件，为生产提供依据。
1 仪器与试药
DIONEX 3000高效液相色谱仪(在线脱气、自动进样、光电二极管阵列检测器、Chromeleon色谱工作站，美国戴安公司)；人参皂苷Rg1对照品(批号：110754-200320，供含量测定用)、人参皂苷Re对照品(批号：110703-200322，供含量测定用)均由中国药品生物制品检定所提供；AB 8型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂)、HP20型大孔吸附树脂(北京绿百叶科技发展有限公司)、D101型大孔吸附树脂(天津农药总厂)；甲醇、乙腈(色谱纯，美国TEDlA公司)；其它试剂为分析纯。人参为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根，购自广州康尔健药业公司。符合《中国药典》2005年版一部人参项下要求。
2 方法与结果
2.1色谱条件色谱柱：DIONEX C18色谱柱(250mm×4.6mm，5um)；流动相：乙腈0.05％磷酸(体积比19.8:80.2)；检测波长：203nm；流速：1.0mL·min-1；在此条件下，供试品中人参皂苷Rg1与人参皂苷Re及其它组分峰能达到基线分离。
2.2对照品溶液的制备精密称取人参皂苍Rg1对照品0.01070g，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度；精密称取人参皂苷Re对照品0.010 15g，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度：精密量取人参皂苷Rgl对照品溶液2.5mL、人参皂苷Re对照品溶液2mL，置5mL量瓶中，加甲醇至刻度。制成每1mL含人参皂苷Rg1 0.535mg、人参皂苷Re 0.406mg的溶液，作为对照品溶液。
2.3标准曲线的制备分别精密吸取不同浓度的对照品溶液注入高效液相色谱仪中，以峰面积积分值为纵坐标(Y)，以人参皂苷Rg1微克数为横坐标(X)，计算回归方程Y=262173X-692964，r=0.9997，表明人参皂苷Rg1在5.35～53.5ug范围内与蜂面积积分值呈良好线性关系。以峰面积积分值为纵坐标(Y)，以人参皂苷Re微克数为横坐标(X)，计算回归方程Y=214558X-731 757，r=0.9998，表明人参皂苷Re在4.06～40.6ug范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.4优选提取工艺
2.4.1提取溶剂的选择人参主要有效成分皂苷类溶于水及乙醇，因此，可用水或乙醇为溶剂提取。首先分别以体积分数为50％和70％的乙醇、水为提取溶剂进行提取，结果显示以乙醇为溶剂时，人参皂苷Rg1、Re提取率较高。进而采用正交实验优选人参醇提工艺条件。
2.4.2实验设计以人参皂苷Ra1、Re为指标。采用L9(34)正交实验设计对影响提取效率的因素进行考察。
2.4.3供试品溶液的制备依照处方分别称取人参20g，置圆底烧瓶中，按L9(34)实验列号各条件回流提取。滤过，合并提取液，定容至1000L，作为样品溶液。精密吸取样品溶液各100mL，水浴蒸干，残渣加水25mL使溶解，移置分液漏斗中，用水饱和正丁醇提取4次，每次20mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次25mL，弃去氨试液，正丁醇液水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，并定容至10mL量瓶中，作为供试品溶液。
2.4.4实验结果精密吸取供试品溶液、对照品溶液，分别注入液相色谱仪中，测定峰面积，计算人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的含量。由实验结果可知，因素A、D对人参提取效率有显著性影响，在以人参皂苷Rg1、Re为指标考察的四个因素中，依次排列为D＞A＞B＞C。较优的工艺应为A283C2D3，即体积分数为70％乙醇6倍量提取3次，每次1h。
2.5精制工艺考察按处方称取人参1000g，按照优选提取工艺条件操作，收集提取液，减压回收乙醇至无醇味，作为样品溶液，备用。
2.5.1吸附条件考察分别量取处理好的AB 8型、D101型、HP20型等大孔吸附树脂各10mL。平行两份，装柱，各精密量取样品溶液200mL通过树脂柱，以水洗至流出液近无色，收集流出液，定容。再以体积分数为70％乙醇100mL洗脱至洗脱液近无色，收集洗脱液，定容，流出液分别取样，按照“2.4.3”项下制备方法制备供试品溶液，注入液相色谱仪中，测定人参皂苷Rg1、Re的含量。计算大孔吸附树脂比吸附量、洗脱率，结果显示AB 8型大孔吸附树脂对人参皂苷Rg1、Re的比吸附量和洗脱率均高于其他树脂，分别为4mg／mL树脂和98.3％，故选择AB 8型大孔吸附树脂。
2.5.2洗脱条件考察①洗脱溶剂浓度考察。精密量取样品溶液90mL通过AB 8型大孔吸附树脂柱(10mL树脂装柱，内径1.5cm)，树脂柱水洗至近无色，然后依次用体积分数为30％、50％、70％、90％乙醇各20mL洗脱，分别收集洗脱液，制备供试品溶液，注入液相色谱仪中，测定人参皂苷Rg1 、Re的含量。结果显示，体积分数为70％乙醇的累计洗脱率已达92.59％，故确定洗脱溶剂浓度为70％。②洗脱溶剂用量考察。精密量取处理后样品溶液通过树脂柱，水洗至流出液近无色，量取体积分数为70％乙醇60mL洗脱，分段收集洗脱液，制备供试品溶液，测定人参皂苷Rg1、Re的含量，结果显示4倍量树脂体积的洗脱溶剂洗脱率即可达到95.72％，故确定洗脱溶剂用量为4倍树脂体积。
3 讨论
3.1大孔吸附树脂具有物理化学稳定性高、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长、节省费用等诸多优点，在对总皂苷的粗分离和除去水溶性色素、多糖和无机盐等杂质显示出其独特的效果。本文通过考察影响树脂吸附的因素，发现药液浓度对树脂的吸附有显著影响，如药液浓度过低则精制时间增加，效率降低；药液浓度过高则影响树脂的吸附，造成吸附量降低。
3.2大孔吸附树脂可显著降低总固体得率，使活性成分高度富集，精制前提取液总固体得率为20％，人参皂苷Rg1、Re含量为5.10mg／g：大孔树脂精制后，其总固体得率为1.5％，人参皂苷Rg1、Re含量为56.88mg／g。同时吸湿性降低，有利于制成现代剂型的中药，便于质量控制。