目的在原核质粒中克隆金黄色葡萄球菌(S.aureus)Esx A基因,并进行表达及纯化,为其功能研究奠定基础。方法根据Gene Bank中S.aureus Esx A序列,设计特异性引物PCR扩增Esx A基因,PCR产物纯化后经Eco RΙ和XhoΙ双酶切,连接至p ET-28a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,His柱纯化重组Esx A蛋白,SDS-PAGE和Western blot验证重组蛋白的表达。结果成功克隆Esx A基因,基因全长294 bp,起始于ATG,终止于TAA,预测的分子量为11 036.2,等电点为4.61,经双酶切在294 bp处可见目的条带,基因测序显示Esx A在正确阅读框内,提示重组蛋白构建成功。SDS-PAGE显示重组蛋白在分子量大约14.5×103 Mr处左右见到可溶性的蛋白表达,Western blot分析识别14.5×103 Mr重组蛋白。结论在大肠杆菌中成功克隆表达Esx A蛋白,为其功能研究奠定基础。