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目的研究中药延胡索中去氢紫堇碱对照品的制备及含量测定方法。方法采用硅胶柱色谱与半制备高效液相色谱组合分离技术,分离纯化去氢紫堇碱,采用薄层色谱法和高效液相色谱面积归一化法检测纯度,波谱法鉴定其结构,反相高效液相色谱法测定其含量。结果制备的化合物鉴定为去氢紫堇碱,纯度为98.7%;含量测定在0.0763~0.4576μg呈良好线性关系,r=0.9998,平均回收率为104.44%,RSD为2.36%(H=6)。结论该制备方法效率高,所得化合物纯度高,可用于大量制备。含量测定方法准确,简便,可靠,重复性好。