【摘 要】
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目的 探讨近视相关视黄醇脱氢酶5(RDH5)基因内含子区单核苷酸多态性(SNP)位点rs3138144(G>C)对其启动子功能的影响.方法 从初始密码子ATG往前扩增1500 bp的5'端上游调控区域
【机 构】
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637000 四川省南充市,川北医学院附属医院眼科,川北医学院眼视光学系
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目的 探讨近视相关视黄醇脱氢酶5(RDH5)基因内含子区单核苷酸多态性(SNP)位点rs3138144(G>C)对其启动子功能的影响.方法 从初始密码子ATG往前扩增1500 bp的5'端上游调控区域作为拟研究的启动子片段,以包含rs3138144位点的长220 bp的区段作为研究的内含子片段.与萤火虫荧光素酶报告基因载体pGL3-Basic进行重组质粒的克隆与鉴定,构建rs3138144荧光素酶报告基因质粒野生型(pGL3-RDH5-G)和rs3138144荧光素酶报告基因质粒突变型(pGL3-RDH5-C)载体,同时设定pGL3-Basic作为对照.与内参质粒pRL-TK共转染ARPE-19细胞及HEK293细胞,通过双荧光素酶报告基因系统检测报告基因活性.结果 在ARPE-19细胞中,野生型rs3138144位点荧光素酶相对活性为0.806±0.156,突变型为0.525±0.130,对照为0.085±0.027,野生型荧光素酶相对活性高于突变型及对照,差异均有统计学意义(均为P<0.05).在HEK293细胞中,野生型rs3138144位点荧光素酶相对活性为0.075±0.013,突变型为0.040±0.006,对照为0.004±0.001,野生型高于突变型及对照,差异均有统计学意义(均为PC)影响RDH5基因启动子转录活性.
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