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摘要：目的：观察复合应激因素刺激对大鼠行为学改变的影响，对CFS动物模型的制作提供实验依据。方法：运用情志刺激与过度劳累相结合的复合应激因素，观察大鼠在接受刺激后悬挂不动和力竭游泳时间的变化。结果：造模后大鼠悬挂不动时间明显增加、力竭游泳时间明显减少。结论：复合应激因素刺激使大鼠体力明显下降，产生了类似CFS的临床症状。
关键词：复合应激;大鼠;行为学能力
慢性疲劳综合征（Chronic fatigue syndrome，CFS）是人群亚健康的主要表现形式之一，于1988年由美国疾病控制与预防中心正式确定病名及诊断标准。随着社会高速发展，在快节奏生活、高压力工作环境中，以慢性疲劳为主诉的患者日益增多，CFS已成为当今威胁人类健康的重大问题，成为国内外医者关注和研究的热点。动物实验作为研究CFS的重要途径，模型制备成功与否对研究有重大影响。本研究应用情志刺激与过度劳累相结合的复合应激刺激，制作慢性疲劳大鼠模型，并观察大鼠行为学的改变，为CFS的动物实验研究提供实验依据。
1 实验材料
1.1 实验动物
健康清洁级（Ⅱ）雄性Wistar大鼠20只，体重（160±10）g。标准饲料喂养，室温15～25℃，相对湿度45%～60%，自由摄食、饮水。
1.2 实验器材
硬塑料束缚筒：管状，长20cm，筒口外径6cm，内径5.3cm，筒内前端置一直径略小于筒的内径、并可以前后调节的无底、圆嘴玻璃瓶，其瓶口为通气口（距离筒口5cm左右），后端为可开关闸门。
游泳箱：规格为185cm×58cm×70cm。
秒表，温度计。
2 实验方法
2.1 分组方法
20只大鼠适应性饲养一周后，随机分为正常组和模型组，每组10只。
2.2 造模方法
采用慢性束缚加强制冷水游泳的复合应激因素刺激制作模型。规定单号日期进行束缚，双号日期进行冷水游泳，造模时间为4周。在造模的整个过程中，正常组大鼠处于同一环境中，但不予以进食和饮水。
（1）慢性束缚：造模期间，模型组隔日束缚一次，每天束缚时间不同，随机确定。束缚时，使大鼠钻进束缚筒内，并调节到不产生强烈反抗的紧张程度，限制其活动，1h后取出放回笼中。
（2）强制冷水游泳：隔日令模型组大鼠在不同时间于冷水（水中置温度计，视水温变化调节放入冰块的数量，使水温维持在12℃左右）中游泳，期间防止大鼠团抱自救或因力竭沉人水中。每次一组，游泳持续7分钟，然后将动物捞出，用布擦拭、吹风机吹干皮毛后放回笼中。
2.3 指标测定
（1）一般情况观察
造模期间，每天观察大鼠的饮水量、进食量、体重、粪便、鼠毛色泽、爬行动作及对外界刺激敏感度等情况。
（2）鼠尾悬挂实验
本实验在造模结束后第2天进行。使大鼠呈倒挂状，大鼠为克服不正常的体位而挣扎活动，但活动一定时间后，出现间断性“不动”，显示“失望”状态。观察5min内的不动时间（大鼠处于完全静止不动状态的总时间）。
（3）力竭游泳实验
本实验在造模结束后第2天进行。游泳时水深为5Ocm，水温为室温。将事先标记好的大鼠同时置入游泳池，记录大鼠从入水到游泳至力竭（头部沉入水中10秒中不能浮出水面为力竭标准）的时间。
3 统计学分析
采用SPSS19.0统计软件进行数据处理，各组数据均以“均数±标准差（）”的形式表示，采用单因素方差分析法进行组间比较。
4 实验结果
4.1 一般情况观察
造模前，各组大鼠的饮水量、进食量、体重、大鼠粪便、皮毛色泽、眯眼等均无明显差异。随着造模时间的推移，正常组大鼠神态安静，时而活泼好动，皮毛光洁整齐，眼睛有神，体重正常增长;模型组大鼠饮水量、进食量略有减少，体型瘦弱，体重增加不明显，精神倦怠，皮毛失去光泽、稀疏，眼神黯淡无光，活动减少，眯眼明显，粪便稀，爱扎堆，反应力降低。
4.2 鼠尾悬挂实验时间测定
结果显示：模型组大鼠悬尾后不动时间明显长于正常组，具有显著差异（P<0.05），表明复合应激因素刺激导致大鼠体力明显下降，有“抑郁”情绪倾向，具有躯体和心理疲劳。
4.3 力竭游泳实验测定
结果显示，模型组大鼠游泳至力竭的时间低于正常组，具有极显著差异，表明复合应激因素刺激导致大鼠体力明显下降，力竭游泳時间明显减少，具有躯体疲劳。
5 讨论
本研究通过慢性束缚和冷水游泳相结合的方法建立CFS模型，模仿人类因长期心理应激和躯体应激而诱发产生的烦躁、绝望以及免疫功能低下等CFS症状。在实验中，大鼠在束缚筒中所产生的烦躁、绝望等状态与人类抑郁、心理压力增大等精神状态很相似。同时，根据大鼠游泳喜欢温水的习惯，选择冷水游泳，既是对大鼠体力的巨大消耗，也对大鼠精神状态造成一定压力。造模结束后，模型组大鼠身体消瘦，体重增加不明显，反映双重刺激引起大鼠产生CFS的相应症状，导致大鼠体力和精神状态下降。我们还选择了比较经典的鼠尾悬挂实验和力竭游泳实验评价其行为学能力。通过测定发现，模型组大鼠悬挂不动时间明显增加、力竭游泳时间明显减少，说明复合应激因素刺激使大鼠体力明显下降，其表现出的与人类CFS类似的“抑郁”、“失望”情绪明显增加。
综上所述，本研究中的慢性复合刺激所引起的体力和精神损害与临床的CFS症状相似，故认为本模型是可行的。
参考文献：
[1] Holmes GP，，Kaplan JE，，Gantz NM，et al.Chronic fatigue syndrome：a working case definition[J].Ann Intern Med，1988（10）.
[2] 王天芳，刘雁峰，杨维益，等.消疲怡神口服液治疗慢性疲劳综合征的临床研究[J].北京中医药大学学报，1999（04）.
关键词：复合应激;大鼠;行为学能力
慢性疲劳综合征（Chronic fatigue syndrome，CFS）是人群亚健康的主要表现形式之一，于1988年由美国疾病控制与预防中心正式确定病名及诊断标准。随着社会高速发展，在快节奏生活、高压力工作环境中，以慢性疲劳为主诉的患者日益增多，CFS已成为当今威胁人类健康的重大问题，成为国内外医者关注和研究的热点。动物实验作为研究CFS的重要途径，模型制备成功与否对研究有重大影响。本研究应用情志刺激与过度劳累相结合的复合应激刺激，制作慢性疲劳大鼠模型，并观察大鼠行为学的改变，为CFS的动物实验研究提供实验依据。
1 实验材料
1.1 实验动物
健康清洁级（Ⅱ）雄性Wistar大鼠20只，体重（160±10）g。标准饲料喂养，室温15～25℃，相对湿度45%～60%，自由摄食、饮水。
1.2 实验器材
硬塑料束缚筒：管状，长20cm，筒口外径6cm，内径5.3cm，筒内前端置一直径略小于筒的内径、并可以前后调节的无底、圆嘴玻璃瓶，其瓶口为通气口（距离筒口5cm左右），后端为可开关闸门。
游泳箱：规格为185cm×58cm×70cm。
秒表，温度计。
2 实验方法
2.1 分组方法
20只大鼠适应性饲养一周后，随机分为正常组和模型组，每组10只。
2.2 造模方法
采用慢性束缚加强制冷水游泳的复合应激因素刺激制作模型。规定单号日期进行束缚，双号日期进行冷水游泳，造模时间为4周。在造模的整个过程中，正常组大鼠处于同一环境中，但不予以进食和饮水。
（1）慢性束缚：造模期间，模型组隔日束缚一次，每天束缚时间不同，随机确定。束缚时，使大鼠钻进束缚筒内，并调节到不产生强烈反抗的紧张程度，限制其活动，1h后取出放回笼中。
（2）强制冷水游泳：隔日令模型组大鼠在不同时间于冷水（水中置温度计，视水温变化调节放入冰块的数量，使水温维持在12℃左右）中游泳，期间防止大鼠团抱自救或因力竭沉人水中。每次一组，游泳持续7分钟，然后将动物捞出，用布擦拭、吹风机吹干皮毛后放回笼中。
2.3 指标测定
（1）一般情况观察
造模期间，每天观察大鼠的饮水量、进食量、体重、粪便、鼠毛色泽、爬行动作及对外界刺激敏感度等情况。
（2）鼠尾悬挂实验
本实验在造模结束后第2天进行。使大鼠呈倒挂状，大鼠为克服不正常的体位而挣扎活动，但活动一定时间后，出现间断性“不动”，显示“失望”状态。观察5min内的不动时间（大鼠处于完全静止不动状态的总时间）。
（3）力竭游泳实验
本实验在造模结束后第2天进行。游泳时水深为5Ocm，水温为室温。将事先标记好的大鼠同时置入游泳池，记录大鼠从入水到游泳至力竭（头部沉入水中10秒中不能浮出水面为力竭标准）的时间。
3 统计学分析
采用SPSS19.0统计软件进行数据处理，各组数据均以“均数±标准差（）”的形式表示，采用单因素方差分析法进行组间比较。
4 实验结果
4.1 一般情况观察
造模前，各组大鼠的饮水量、进食量、体重、大鼠粪便、皮毛色泽、眯眼等均无明显差异。随着造模时间的推移，正常组大鼠神态安静，时而活泼好动，皮毛光洁整齐，眼睛有神，体重正常增长;模型组大鼠饮水量、进食量略有减少，体型瘦弱，体重增加不明显，精神倦怠，皮毛失去光泽、稀疏，眼神黯淡无光，活动减少，眯眼明显，粪便稀，爱扎堆，反应力降低。
4.2 鼠尾悬挂实验时间测定
结果显示：模型组大鼠悬尾后不动时间明显长于正常组，具有显著差异（P<0.05），表明复合应激因素刺激导致大鼠体力明显下降，有“抑郁”情绪倾向，具有躯体和心理疲劳。
4.3 力竭游泳实验测定
结果显示，模型组大鼠游泳至力竭的时间低于正常组，具有极显著差异，表明复合应激因素刺激导致大鼠体力明显下降，力竭游泳時间明显减少，具有躯体疲劳。
5 讨论
本研究通过慢性束缚和冷水游泳相结合的方法建立CFS模型，模仿人类因长期心理应激和躯体应激而诱发产生的烦躁、绝望以及免疫功能低下等CFS症状。在实验中，大鼠在束缚筒中所产生的烦躁、绝望等状态与人类抑郁、心理压力增大等精神状态很相似。同时，根据大鼠游泳喜欢温水的习惯，选择冷水游泳，既是对大鼠体力的巨大消耗，也对大鼠精神状态造成一定压力。造模结束后，模型组大鼠身体消瘦，体重增加不明显，反映双重刺激引起大鼠产生CFS的相应症状，导致大鼠体力和精神状态下降。我们还选择了比较经典的鼠尾悬挂实验和力竭游泳实验评价其行为学能力。通过测定发现，模型组大鼠悬挂不动时间明显增加、力竭游泳时间明显减少，说明复合应激因素刺激使大鼠体力明显下降，其表现出的与人类CFS类似的“抑郁”、“失望”情绪明显增加。
综上所述，本研究中的慢性复合刺激所引起的体力和精神损害与临床的CFS症状相似，故认为本模型是可行的。
参考文献：
[1] Holmes GP，，Kaplan JE，，Gantz NM，et al.Chronic fatigue syndrome：a working case definition[J].Ann Intern Med，1988（10）.
[2] 王天芳，刘雁峰，杨维益，等.消疲怡神口服液治疗慢性疲劳综合征的临床研究[J].北京中医药大学学报，1999（04）.